---性酶切分析法
---性酶切分析法是指基因組或一段---用---性內切酶---產生的片段經電泳等方法分離形成---的條帶圖譜，對dna序列的特征進行的分析。---性酶是生物體內能識別并切割特異的雙鏈dna序列的一種內切---酶。它是可以將外來的dna切斷的酶，即能夠---異源dna的侵入并使之失去活力，但對自己的dna卻無損害作用。
---酶是基因工程中所用的重要切割工具。科學家已從原核生物中分離出了許多種---酶，并且已經商品化，在基因工程中廣泛使用。根據---酶切割的特點，可將它們分為兩大類：一類是切割部位無特---的；另一類是可特---地識別核苷酸序列，即只能在一定的dna序列上進行切割。
dna部分片段的連接
dna部分片段通過用每一種---性內切酶過量---底物dna而獲得。這些片段隨后用t4 dna連接酶連接( 5′末端濃度為0.1-1.0 μm)。連接的片段然后用同一種---性內切酶重切。僅當3′和 5′末端都保留完整，連接反應才會發生;而且只有那些識別位點完全恢復的分子才能被重切。切割后正常的帶型說明3′和 5′末端都是完整的，而且準備的酶樣品中檢測不到---外切酶和磷酸酶。
質粒載體和外源ｄｎａ中---酶切位點的性質
如今，質粒載體中---酶切位點的種類---繁多，因而通常都有可能找到某種帶---酶切位點恰恰與外源ｄｎａ部分片段本身-二致的載體。這就具備一個不可1比擬的優點，也應是可以用相應的---酶---重組質粒崦回收外源ｄｎａ。另一種方案，則是把片段插入到載體中能產生匹配末端的任何位點中。例如，識別不同的六核苷酸的---酶bamhl和bglⅱ產生具有相同---末端的---酶切片段，快切酶，這樣用bglⅱ---而制備的外源ｄｎａ部分片段可以克1隆到用banhl---的質粒中。這通常會使接合序列不能被曾用于外源ｄｎａ或制備載體的任何一種酶所切開。然而很多清況下，用切點位于多克1隆序列側翼的---酶進行---，可將片段從重組質粒中摘出。偶爾在質粒的以及外源ｄｎａ兩端的---酶切位點之間，不可能找到“門當戶對”的搭配關系。這時可用下面兩種方案加以解決：
1在線狀質粒末端和或外源ｄｎａ部分片段的末端接上合成在接頭或銜接頭。
2在得到控制的反應條件下，用大腸桿1菌ｄｎａ聚合酶i ｋlenow片段部分補平帶3凹端的ｄｎａ部分片段。如第九章所討論，這樣常可以使那些不相匹配的---酶切位點轉變為互補末端，從而促進載體和外源ｄｎａ的連接。因為部分補平的反應消除了同一分子兩端彼此配對的能力，故連接反應過程中環化和自身寡聚化的機會也會有所降低
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