hot start pcr的原理
hot start pcr法是提高pcr特---的重要方法之一。這種方法可以防止在pcr反應第yi步驟因引物的錯配或引物二聚體的形成而導致的非特---擴增，從而可以提高目的dna部分片段的擴增效率。takara taq hot start version，takara ex taq hot start version，takara la taq hot start version，primestar hs dna polymerase，mightyamp dna polymerase是抗1體和dna聚合酶的混合制品。抗1體在高溫加熱前與聚合酶相結合，抑制聚合酶的活性。在pcr反應zui初的dna變性步驟，抗1體變性，gdna去除反轉錄試劑盒，聚合酶活性恢復。
污染的監測
一個好的實驗室，要時刻注意污染的監測，考慮有無污染是什么原因造成的污染，以便采取措施，防止和消除污染。
1、陽性對照：在建立pcr反應實驗室及一般的檢驗單位都應設有pcr陽性對照，它是pcr反應是否成功、產物條帶位置及大小是否合乎理論要求的一個重要的參考標志。陽性對照要選擇擴增度中等、重復性好，經各種鑒定是該產物的標本，如以重組質粒為陽性對照，其含量宜低不宜高100個拷貝以下。但陽性對照尤其是重組質粒及高濃度陽性標本，其對檢測或擴增樣品污染的可能性很大。因而當某一pcr試劑經自己使用穩定，檢驗人員心中有數時，在以后的實驗中可免設陽性對照。
2、陰性對照：每次pcr實驗務必做陰性對照。它包括：
1標本對照：被檢的標本是血1清就用鑒定后的正常血1清作對照；被檢的標本是組織細胞就用相應的組織細胞作對照。
2試劑對照：在pcr試劑中不加模板dna或rna，進行pcr擴增，以監測試劑是否污染。
3、重復性試驗。
4、選擇不同區域的引物進行pcr擴增。
基因分型
pcr可用于檢測特定細胞或生物體中等位基因的序列差異。例如，基因敲除和敲入小鼠等生物的基因分型[3]。引物對經設計位于目標區域側翼，可根據是否存在擴增子及擴增子長度來檢測遺傳變異。
但是如果為了檢測特定核苷酸突變，則必須對擴增的序列進行進一步分析。例如， pcr擴增子測序就是研究單核苷酸變異snvs和單核苷酸多態性snp的方法之一。---使用高保真dna聚合酶，以防止在pcr過程中引入多余的突變。
通過pcr進行基因分型也是對癌1癥和遺傳病中的 突變進行遺傳分析的一個基本方式。
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