t4 rna連接酶
用途:用rna 3末端標記;rna和rna分子間連接;寡核苷酸的環化;trna修飾;5 race中寡核苷酸連接到cdna單鏈;在蛋白質特定位點引入非天然---酸。
來源:由大腸桿1菌表達,表達基因的來源為t4嗜菌體。
活性定義:37℃30分鐘內,催化1 nmol 5-[p]-(a)12-18成為磷酸酶不能---的環形產物所需的酶量定義為1個活性單位。
活性檢測條件:50mm tris-hcl(ph7.5),10mm mgcl2,10mm dtt,1mm atp,10μm 5-[p]-(a)12-18(10μm in 5-termini)。
純度:不含dna內切酶和外切酶,不含rna酶,不含磷1酸酯酶。
酶儲存溶液:10mm tris-hcl(ph7.5),1mm dtt,磷酸化酶,50mm kcl,0.1mm edta,50%(v/v)glycerol。
reaction buffer(10x):500mm hepes-naoh(ph8.0 at 25℃),100mm mgcl2,100mm dtt。
據研究表明rna聚合酶擁有現代蛋白質聚合酶的許多特征,它可以進化從而識別出rna啟動子,然后copy rna。研究意味著,生命進化早期出現的同樣的rna酶也可能表現出如此復雜的生物學特征。
有證據表明,rna先于dna和蛋白質出現。例如,人體細胞內制造蛋白質的“機器”核糖體就由rna制造而成。此外,dna也由rna組成。由于rna是一種萬1能工具,可以同時發揮蛋白質和dna的功能,這表明后來進化出現的dna和蛋白質是一種“升級”,以增強起初由rna支持的細胞功能。昂勞實驗室發現的聚合酶表明,rna copy在原始生命體內確實可能存在。