1.欲冷凍保存之細胞應在生長---且存活率高之狀態,約為80~90%致密度。
冷凍前檢測細胞是否仍保有其特有性質,200-074-400凍存袋多少錢,例如hybridoma應在冷凍保存---至二日測試是否有antibody
2.細胞在液氮中可長期凍存沒有時間---,凍存袋多少錢,而不會影響細胞活力﹔在-70度可保存數月。注意冷凍保護劑之品質。
dmso應為試劑級等級,200-074-401凍存袋多少錢,無菌且無色是直接購買無菌產品,以5~10m1小體積分裝,4℃避光保存,勿作多次解凍。
3.凍存細胞數量要足夠。無論再怎么小心,細胞在冷凍和復蘇過程中總會死掉一批的。所以,一開始凍存細胞的數量要足夠。一般要達到5× 106 /毫升,一瓶不夠兩瓶湊。但是,這個不能一概而論。有些細胞,比如雜交瘤細胞,只需要1-3x 106 /毫升
適度地保存一定量的細胞,可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種,起到了細胞保種的作用。除此之外,還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。 細胞凍存時向培養基中加入保護劑--終濃度5%.15%的甘油或二---(dmso),可使溶液冰點降低,cs50凍存袋多少錢,加之在緩慢---條件下,細胞內水分透出,減少了冰晶形成,從而避免細胞損傷。
1. 配制含10%dmso或甘油、10~20%小牛血的凍存培養液;
2. 取對數生長期的細胞,去除舊培養液,用pbs清洗。
3. 去除pbs,加入適量胰蛋白酶覆蓋培養皿表面把單層生長的細胞---下來;
4. 離心1000rpm,5min;
5. 去除胰蛋白酶,加入適量配制好的凍存培養液,用吸管輕輕吹打使細胞均勻,計數,調節凍存液中細胞的密度為5×106/ml~1×107/ml;
6. 將細胞分裝入凍存管中,每管1~1.5 ml;
7. 在凍存管上標明細胞的名稱,凍存時間及操作者;
8. 凍存:標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/ min;當溫度達-25℃以下時,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時,則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中過夜,取出凍存管,移入液氮容器內。