通常活性氧陽性對照在---細胞20-30分鐘后可以---提高活性氧水平。
收集細胞后裝載探針：按照1：1000用無培養液稀釋dcfh-da，使終濃度為10微摩爾/升。細胞收集后懸浮于稀釋好的dcfh-da中，細胞濃度為一百萬至二千萬/毫升，37℃細胞培養箱內孵育20分鐘。每隔3-5分鐘顛倒混勻一下，使探針和細胞充分接觸。用無細胞培養液洗滌細胞三次，以充分去除未進入細胞內的dcfh-da。直接用活性氧陽性對照及自己感興趣的---細胞，或把細胞等分成若干份后---細胞。通常活性氧陽性對照在---細胞20-30分鐘后可以---提高活性氧水平。
2.、檢測
對于原位裝載探針的樣品可以用激光共-顯微鏡直接觀察，或收集細胞后用熒光分光光度計、熒光或流式細胞儀檢測。
對于收集細胞后裝載探針的樣品可以用熒光分光光度計、熒光或流式細胞儀檢測，pcr，用激光共-顯微鏡直接觀察也可以。
emsa實驗
emsa:凝膠遷移或電泳遷移率檢測是一種檢測蛋白質和dna序列相結合的技術，初用于研究dna結合蛋白和其相關的dna結合序列相互作用，可用于定性和定量分析。分為2種類型：同位素標記探針，非同位素標記探針。
通常將純化的蛋白和細胞粗提液和32p同位素標記的dna或rna探針一同保溫，在非變性的聚bing烯凝膠電泳上，分離復合物和非結合的探針。dna-復合物或rna-復合物比非結合的探針移動得慢。同位素標記的探針依研究的結合蛋白的不同，可是雙鏈或者是單鏈。當檢測如轉錄調控因子一類的dna結合蛋白，可用純化蛋白，部分純化蛋白，或核細胞抽提液。在檢測rna結合蛋白時，依據目的rna結合蛋白的位置，可用純化或部分純化的蛋白，也可用核或胞質細胞抽提液。競爭實驗中采用含蛋白結合序列的dna或rn片duan和gua核苷酸片段特異，和其它非相關的片段非特異，來確定dna或rna結合蛋白的特---。在競爭的特異和非特異片段的存在下，依據復合物的特點和強度來確定特異結合。
動物組織細胞基因組dna提取
操作步驟
1. 取新鮮或冰凍動物組織塊0.1g0.5cm3，盡量剪碎。置于玻璃勻漿器中，加入1ml的細胞裂解緩沖液勻漿至不見組織塊，轉入1.5ml 離心管中，---怎么做，加入蛋白酶k
500ug/ml20μl，混勻。在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min，也可轉入37℃水浴12～24h，間歇振蕩離心管數次。于臺式離心機以12000 rpm離心5min，取上清液入另
一離心管中。
2.加2倍體積異，麗水pcr，倒轉混勻后，可以看見絲狀物，用100ul 吸頭挑出，涼干，用200ul te 重新溶解。可進行pcr反應等，需要進一步純化的按下列步驟進行
3.加等量的酚??振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。
4.取上層溶液至另一管，加入等體積的?，振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。
5. 取上層溶液至另一管，加入1/2體積的7.5mol/l氨加入2倍體積的無水---，-，混勻后室溫沉淀2min ，離心12000 rpm ，10min。
6.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉。
7.用1ml 70%---洗滌沉淀物1次，離心12000 rpm ， 5min。
8.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉，室溫干燥。
9.加200ul te重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?c20℃保存備用。
10.吸取適量樣品于genequant上檢測濃度和純度。
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