分子實驗介紹——印跡western blot檢測
通過sds-page凝膠將細胞或生物樣品內的蛋白按照蛋白分子量從大到小規律分離開。經過page分離的蛋白質樣品，pcr實驗室，轉移到固相載體例如纖維素薄膜或pvdf膜上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的起反應，再與酶或同位素標記的第二起反應目前主要用hrp標記的第二，經過底物顯色或自顯影以檢測電泳分離的特---目的基因表達的蛋白成分目前主要使用魯米諾和二-的hrp反應發出熒光，通過儀器或者膠片顯色。該技術廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。
實驗流程：細胞收集-細胞裂解，蛋白提取-蛋白變性-sds-page電泳-蛋白質轉膜印記-蛋白封閉-目的孵育-二抗孵育-顯色拍照
結果示例：
圖 a不同大小的質粒轉染細胞后，western blot檢測圖片；b a蛋白不同培養時間后western blot檢測圖片；c 使用image pro plus軟件對a蛋白灰度檢測，a蛋白表達變化統計圖
蛋白質定量組學服務
細胞內蛋白質組豐度的動態變化對不同生命過程有重要影響。例如在許多---的發生和發展進程中，pcr檢測，常常伴隨著某些蛋白質的表達異常。目前定量蛋白質組學技術主要分為標記(label)策略和非標記的(label free)定量策略，pcr引物設計，其中標記策略又分為體內標記(如 silac、15n 標記)，以及體外標記(如 itraq、tmt 標記) 。
傳統的基于2d雙向凝膠電泳分離的蛋白質組通常可以鑒定出約1000種蛋白，對全蛋白質組的覆蓋僅在5~10%左右，不能滿足高通量定量蛋白質表達譜分析的要求。我們結合樣品制備與高分辨率、高靈敏度的液相色譜-質譜聯用技術，可在細胞與組織類樣品中鑒定直至多于10000個蛋白，對全蛋白質組的覆蓋>;60%。結合生物信息學分析，pcr，為您構建高通量蛋白質定量表達譜。
mirna測序
microrna(mirna)是一種大小約21—23個堿基的單鏈小分子rna，是由具有發夾結構的約70-90個堿基大小的單鏈rna前體經過dicer酶加工后生成，不同于sirna雙鏈但是和sirna密切相關。microrna通過和靶基因mrna堿基配對引導沉默復合體risc降解mrna或抑制mrna的翻譯，從而在轉錄后水平調控蛋白表達新發現mirna也能在轉錄水平調控基因表達。mirna在物種進化中相當保守，在動物、植物和---等中發現的mirna表達均有嚴格的組織特---和時序性。mirna在細胞生長和發育過程中起多種作用，包括調控發育、分化、凋亡和增殖等。
目前研究mirna的方法主要是realtime-pcr、生物芯片技術以及第二代測序技術。基于第二代測序技術的mirna測序，可以一次獲得數百萬條mirna序列，能夠快速鑒定出不同組織、不同發育階段、不同---狀態下已知和未知的mirna及其表達差異，為研究mirna對細胞進程的作用及其生物學影響提供了有力工具。
登錄后臺
