工業(yè)石蠟一般從石油當(dāng)中直接提取,在工業(yè)提取過程當(dāng)中會含有多環(huán)芳烴和稠環(huán)芳烴,這兩種物質(zhì)是非常強(qiáng)的---物。此外,人體攝入石蠟后,還會造成---等腸胃---。 目前部分火鍋底料、油料、方便粉絲和一些劣質(zhì)桶裝方便面桶壁中含有此類物質(zhì),甚至一些方便筷和紙杯中也能發(fā)現(xiàn)工業(yè)石蠟的存在。
---為金黃色或琥珀色粘稠液體,不燃、揮發(fā)性極微。能溶于大部分有ji溶劑,不溶于水和---。加熱至120℃以上徐徐自行分解,能放出lv---氣體,鐵、鋅等金屬的氧化物會促進(jìn)其分解。---為聚氯yi烯的輔助增塑劑。揮發(fā)性低,不燃、無臭、---。本品取代一部分主增塑劑,可降---品成本,并降低燃燒性。主要用于聚氯yi烯電纜料及水管、地板料、薄膜、人造革等。
1.取材
確定所取材料的來源及部位,食品級石蠟,縱切還是橫切;
取材要迅速,防止阻止發(fā)生進(jìn)一步變化,材料體積要適宜。
下圖為植物芽體取樣實(shí)拍。22.固定
1 固定液的選擇
chang用的固定液為faa萬用固定液。
它的優(yōu)點(diǎn)是材料固定時(shí)間不受---,固定時(shí)間短則數(shù)小時(shí),長則數(shù)月或數(shù)年。可做材料保存液
配方: 50%或70%酒精 90ml
冰--- 5 ml
富er馬林 5 ml
(柔軟材料用50%酒精,堅(jiān)硬材料用70%酒精配制)
2材料固定后的處理
沖洗或漂洗:組織固定后應(yīng)充分水洗,除去留在組織內(nèi)的固定液及其結(jié)晶沉淀,否則會影響以后的染色效果。
(材料固定后,若暫時(shí)不能進(jìn)行下一步操作,可于70%的酒精溶液或直接與faa固定液中,于冰箱中4℃存放。)
下圖為固定液浸泡的組織切塊。33.脫水
目的:水和透明劑不能互溶,只有脫去水分后,才能讓透明劑進(jìn)入。
試劑:梯度酒精溶液
流程:70%---85%---95%--100%--- 100% 每步1h-2h左右。
注意事項(xiàng):---脫水梯度和每一步脫水時(shí)間,水要完全脫凈,但也不能過度脫水過久使組織變脆、收縮,這個(gè)時(shí)間大家可以根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)來摸索一下,不必完全按照本操作來。
下圖為自動組織脫水機(jī),適于大量樣品組織脫水用。如果材料體積及樣品量較少可用小燒杯做容器來進(jìn)行逐級脫水。44.透明
目的:純酒精不能與石蠟相溶,還需用能與酒精和石蠟相溶的媒浸液,替換出組織內(nèi)的酒精。
(二甲本是chang用的透明劑,可以---地與石蠟互溶)
流程:二甲本與酒精的等體積混合液1h---純二甲本1h---純二甲本1h。55.浸蠟與包埋
目的:用石蠟取代透明劑,食品級石蠟價(jià)格,使石蠟浸入組織而起支持作用。
浸蠟程序:(恒溫)
1低溫浸蠟36℃:接上步,在有二甲本和材料的燒杯中逐步加碎蠟至過飽和石蠟不能溶解,過夜12-24h。
2高溫浸蠟55-60℃,高于石蠟熔點(diǎn)3℃ :
將上步二甲本與石蠟的混合液倒出,不要倒掉材料,食品級石蠟廠家,將燒杯中加入純石蠟,共5-24h。純石蠟需要更換三次。
關(guān)于石蠟的選擇石蠟熔點(diǎn):
對于較硬的材料,用熔點(diǎn)較高的石蠟進(jìn)行包埋;
當(dāng)切片較薄時(shí)在8μm以下,選用熔點(diǎn)較高的石蠟包埋;
夏季宜采用熔點(diǎn)較高的石蠟56,58℃,冬季宜選用熔點(diǎn)較低的石蠟52,54℃。66.切片
傳統(tǒng)的切片方法是將包埋好的蠟塊用刀片修成規(guī)整的梯形,粘于小木塊上,上機(jī)切片。
新型的切片方法是將包埋框見下圖代替木塊的支撐作用,上機(jī)切片。
切片的厚度可以根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)要求來確定,一般在8μm-20μm范圍內(nèi)。
下圖為傳統(tǒng)切片機(jī)與新型自動切片機(jī)77.粘片與烤片
粘片:用粘片機(jī)將蠟片牢附于載玻片上,防止在后續(xù)的操作中材料脫落。
在載玻片上涂抹粘片機(jī)甲液,再滴蒸餾水乙液,放上蠟片,用濾紙吸取多余的水分。
烤片:將載玻片放于40℃展片臺中烤干。
常用的粘片機(jī)為郝伯特(haupt) 配方:
甲液:明膠 1g 乙液:甲醛 4 ml
蒸餾水 100ml 蒸餾水 100ml
甘油 15 ml
本酚 2g88.脫蠟與復(fù)水、染色
脫蠟?zāi)康模焊稍锖蟮那衅杳撓灱皬?fù)水才能在水溶性染液中進(jìn)行染色。
復(fù)水目的:脫蠟后的材料,如果不經(jīng)過復(fù)水,直接進(jìn)入染色劑中,材料將會---變形,甚至難以染色。
染色目的:使細(xì)胞組織內(nèi)的不同結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)不同的顏色和足夠強(qiáng)的差異以便于觀察。
總體流程:二甲本***1/2 二甲本+1/2純酒精***100%酒精***95%酒精***85%酒精***番紅4h以上***95%酒精***固綠迅速***95%酒精迅速***100%酒精***1/2 二甲本+1/2純酒精***二甲本***二甲本,以上各級約需5~10分鐘,已注明時(shí)間的除外。
染色劑:1%番紅85%酒精配制
0.5%固綠95%酒精配制99.切片脫水、透明和封固
接上步,在載玻片上滴加適量1~2滴中性樹膠,再將潔凈蓋玻片傾斜放下,進(jìn)行封片。
切片放入42℃溫箱中干燥過夜。鏡檢,將合格的切片貼上標(biāo)簽。
封固劑選擇加拿大樹膠canada balsam或中性樹膠
至此,植物組織的石蠟切片大功告成!