大耳山羊肺細(xì)胞

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公司細(xì)胞廣泛用于國(guó)內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。

資源名稱(chēng) 大耳山羊肺細(xì)胞

種屬:ldg-1
形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
培養(yǎng)方法
培養(yǎng)基:m-199:withearle＇sbalancedsaltssolution(ebss)15%nbs
生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．大耳山羊肺細(xì)胞用蓋片鑷將蓋，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板每孔一片或培養(yǎng)皿中每個(gè)平皿可放置2-3片； 
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 
4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 
5．將培養(yǎng)板在5% co2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及---化學(xué)檢測(cè)。 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為---玻璃制造，并經(jīng)過(guò)---洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
棄去培養(yǎng)上清，用pbs或生理鹽水清洗1-2次；
加入2ml0.25%胰酶t25瓶，使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱---；
1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)---情況后加入完全培養(yǎng)基終止---；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)---至可以輕輕吹打下為止；
將細(xì)胞懸液1000rpm左右條件下離心4min，棄上清；
用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，t25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
在1000rpm左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)---時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
棄去培養(yǎng)上清，用pbs或生理鹽水清洗1-2次，加入1ml 0.25%胰蛋白酶t25瓶
1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)---情況后加入完全培養(yǎng)基終止---；
將細(xì)胞懸液1000rpm左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

1 ethylene glycol 規(guī)格：供檢查用 porcineplateletactivatingfactor,pafelisa試劑盒豬血小板活化因子(paf)elisa試劑盒規(guī)格：96t/48t
降二氫辣椒堿 nordihydrocapsaicin 規(guī)格：hplc***95%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠甘油-3-0酸脫氫酶(gapdh)elisa試劑盒 ，英文名： gapdh elisa kit
4-甲化安替比林標(biāo)準(zhǔn)品 4-(methylamino)-antipyrine 規(guī)格：供檢查用 人肺耐藥蛋白(lrp)elisa檢測(cè)試劑盒humanlungresistance-relatedprotein,lrpelisakit 96t/48t
---肼標(biāo)準(zhǔn)品 hydrazine sulfate 規(guī)格：供tlc法系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用 大鼠上皮中性粒細(xì)胞活化肽78(ena-78/cxcl5)試劑盒 rat epithelial neuophil activating peptide 78,ena-78 elisa kit
---肼標(biāo)準(zhǔn)品 hydrazine sulfate 規(guī)格：供檢查用 英文名稱(chēng)ratfixelisakit大鼠凝血因子ix規(guī)格：96t/48t
環(huán)扁桃酯標(biāo)準(zhǔn)品 cyclandelate 規(guī)格：hplc法含量測(cè)定 活體細(xì)胞氧化應(yīng)化性氧(ros)原位染色試劑盒(超氧陰離子)100
化三化標(biāo)準(zhǔn)品 nitrilotriacetic acid 規(guī)格：供hplc法雜質(zhì)檢查用 elisakitcyclin-d3人細(xì)胞周期素d3規(guī)格：48t/96t
1，3-標(biāo)準(zhǔn)品 1,3- propylene glycol 規(guī)格：供檢查用 小鼠甘酸脫氫酶(gldc)elisa試劑盒 ，英文名： gldc elisa kit
---標(biāo)準(zhǔn)品 diethylene glycol 規(guī)格：供檢查用 人堿性胎兒蛋白(bfp)elisa檢測(cè)試劑盒humanbasicfetoprotein,bfpelisakit 96t/48t
氯化化標(biāo)準(zhǔn)品 chlorothiazide 規(guī)格：供hplc法系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用 大鼠三---原氨酸(t3)試劑盒 rat i-iodothyronine,t3 elisa kit
化阿米洛利雜質(zhì)

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
大耳山羊肺細(xì)胞1.研究的對(duì)象是細(xì)胞。
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分細(xì)胞的情況，包括細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
ph、溫度、氧氣、---、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用---化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

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