北京博爾西科技有限公司為您提供鎳瓊脂糖凝膠。提示：本公司全部產(chǎn)品均為科研實(shí)驗(yàn)使用試劑，非---用途、非食品、非體外診斷試劑，不可用于動(dòng)物及人體！
鎳-瓊脂糖凝膠ffida
ni-berpharose ff-ida
1. 產(chǎn)品介紹
鎳-瓊脂糖凝膠ff以瓊脂糖微球?yàn)榛|(zhì)，活化偶聯(lián)亞---二---ida，之后螯合ni2+。ida是金屬螯合層析中常用的配體，和次氮基三---nta相比，ida具有親和力強(qiáng)、載量高、可再生重復(fù)使用等優(yōu)點(diǎn)。
鎳-瓊脂糖凝膠ff主要用于純化含有組氨酸標(biāo)簽his-tag的重組蛋白。組氨酸標(biāo)簽中的咪唑環(huán)同過(guò)渡金屬ni2+形成穩(wěn)定的配位鍵，能特異、牢固和可逆地吸附在固定有ni2+的基質(zhì)上，可通過(guò)增加咪唑濃度對(duì)重組蛋白進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)洗脫。
2.規(guī)格
1ml預(yù)裝柱、5ml預(yù)裝柱、10ml預(yù)裝柱、20ml、100ml、500ml
3.產(chǎn)品性能
性能 指標(biāo)
基質(zhì) 6%瓊脂糖微球
配基 ni2+
載量 ***40mg his標(biāo)簽蛋白/ml
粒徑 45-165μm
---流速 50-300 cm/h
耐壓 0.3mpa
工作溫度 4-40℃
ph穩(wěn)定范圍:正常/脫鎳 5-12/3-14
儲(chǔ)存緩沖液 20%---
儲(chǔ)存溫度 4-8℃
4.純化流程
平衡
鎳-瓊脂糖凝膠ff柱用2-5個(gè)柱體積的初始緩沖溶液進(jìn)行平衡。
建議流速為100 cm/h。
上樣
1樣品一般溶解于ph6-8的初始緩沖液中。提高上樣緩沖液的ph值可以增大載量。
2緩沖液中不能含有edta和檸檬酸鹽，同時(shí)---避免巰基---、dtt等還原劑。
3常用緩沖液有10-100 mm磷酸鈉緩沖液、20-200 mm tris-hcl緩沖液等。
4緩沖液中一般要加入0.15-0.5 m的nacl以消除離子交換作用。
5初次使用鎳-瓊脂糖凝膠ff時(shí)，---使用50 mm pbs50 mm nah2po4、0.5 m nacl、ph 7.4作為初始緩沖液。
洗脫
1增加咪唑濃度進(jìn)行洗脫是鎳-瓊脂糖凝膠ff常用的洗脫方法。
2咪唑?yàn)閴A性，相應(yīng)緩沖液配制后需要用hcl調(diào)節(jié)ph值。
3初次使用鎳-瓊脂糖凝膠ff時(shí)，如不確定洗脫需要的咪唑濃度，---在初始緩沖液中分別加入10 mm、20 mm、50 mm、100 mm、200 mm、500 mm咪唑，濃度從低
到高分別洗脫和收集重組蛋白，之后通過(guò)sds-page電泳等方法鑒定洗脫結(jié)果。
4有條件的可以進(jìn)行咪唑梯度線性洗脫以確定較佳的洗脫條件。
洗脫方法：
1降低ph洗脫：大多數(shù)蛋白在ph4-6會(huì)被洗脫下來(lái)也可以在ph 3~4，緩沖液可以是---鈉、檸檬酸和磷酸鹽緩沖體系。
2競(jìng)爭(zhēng)性洗脫：線性增加或一步增加同金屬離子有親和力的競(jìng)爭(zhēng)物質(zhì)的濃度如0-0.5m咪唑、0-50 mm組氨酸、0-2m nh4cl。梯度洗脫---在起始緩沖液的恒定ph值下進(jìn)行。
3螯合劑洗脫：edta、egta等螯合劑可同金屬離子產(chǎn)生作用力，導(dǎo)致蛋白被洗脫下來(lái)。此法不能分離不同的蛋白，還會(huì)影響蛋白的吸附，導(dǎo)致融合蛋白無(wú)法掛柱。
注：降低ph洗脫和螯合劑洗脫會(huì)使得金屬離子脫落，下次使用前需要重新螯和金屬離子。常用的方法為競(jìng)爭(zhēng)性洗脫。
上述洗脫方法，均須在緩沖液中加入150 -500mm的nacl以消除離子交換作用。
5.再生、清洗、保存
凝膠再生
1多次使用后或需要更換螯合的金屬離子時(shí)，必須將凝膠脫鎳再生。脫鎳方法：用5-10個(gè)柱體積的蒸餾水淋洗柱子，再用5-10個(gè)柱體積的100 mm edta淋洗柱子，---用2-3個(gè)柱體積的0.5 m nacl洗掉殘留的edta。
2多次使用的柱子脫鎳后一般需要進(jìn)行清洗。清洗方法：用0.1-1.0 m naoh反向清洗柱子，50 cm/h保持1-2 h，能去除結(jié)合強(qiáng)的雜質(zhì)，同時(shí)也能去除熱源。
3清洗后需要重新螯合金屬離子。螯合方法：用2-5個(gè)柱體積的蒸餾水充分平衡脫鎳后的柱子，用0.1-0.3 m金屬鹽溶液過(guò)柱5-10個(gè)柱體積以螯合金屬離子，之后用5-10個(gè)柱體積的蒸餾水淋洗以去除未螯合的金屬離子。
在位清洗
1去除因離子交換作用吸附的蛋白：使用1.5m nacl 溶液接觸時(shí)間為10-15 分鐘清洗，然后，再使用去離子水清洗10 個(gè)柱體積。
2去除強(qiáng)疏水性蛋白和脂質(zhì)等：通過(guò)使用30%---醇清洗5-10 個(gè)柱體積，接觸時(shí)間為15-20 分鐘可以去除此類(lèi)污染物。 然后，再使用10 倍柱體積的去離子水清洗。也可以選擇使用含有去污劑的酸性或堿性溶液， 清洗填料2 倍柱體積。例如，含有0.1–0.5% 非離子去污劑的0.1 m ---溶液，接觸時(shí)間 為1–2 小時(shí)。去污劑處理后，需要使用70%的---清洗5 個(gè)柱體積，以---去除去污劑。 ---使用10 倍柱體積的去離子水清洗。
3除去蛋白沉淀、疏水性蛋白：參照凝膠再生步驟。
6.注意事項(xiàng)：
1)使用時(shí)---柱子和緩沖液的溫度一致，避免柱床內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響純化效果。
2)本產(chǎn)品保存條件為20%---，4-8℃。
3) 2-25℃,常壓,避光運(yùn)輸
4僅供科研實(shí)驗(yàn)使用
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