18.引物是經過page純化的,為什么還有堿基缺失或插入?
答:理論---析型page變性電泳,可以區分引物之間一個堿基的差別。但是制備page電泳,上樣量都是非常大,電泳時的條帶非常寬,---,帶與帶之間有重疊,分辨率已下降,電泳后割帶回收目的引物時,很難說不割到差別僅幾個堿基的引物。國內有一個不好的現象,page純化的引物,---怎么做,---是長引物要的量都比較高,導致割的條帶有時可能比較寬。建議:您如果減少od數,引物遇到的問題可能就會少一些。
19. taqman 探針設計的基本原則是什么?
答:下列原則供您參考。
◆taqman 探針位置盡可能靠近擴增引物擴增產物50-150bp,但不能與引物重疊。
◆長度一般為18-40mer 。
◆g-c含量控制在40-80%左右。
◆避免連續相同堿基的出現,---是要避免gggg或更多g出現。
◆在引物的5端避免使用g。
◆選用比較多的堿基c。
◆退火溫度tm控制在 68-70c 左右。
有用的熒光染料參數
分子生物學檢測服務
隨著生命科學和化學的不斷發展,人們對生物體的認知已經逐漸深入到微觀水平。從單個的生物體到qi官到組織到細胞,巴中pcr,再從細胞結構到---和蛋白的分子水平,pcr實驗室,人們意識到可以通過檢測分子水平的線性結構如---序列,來橫向比較不同物種,同物種不同個體,同個體不同細胞或不同生理病理狀態的差異。這就為生物學和醫學的各個領域提供了技術平臺。分子生物學檢測技術是現代分子生物學與分子遺傳學取得進步的結晶,是在人們對基因的結構以及基因的表達和調控等生命本---題的認識日益加深的基礎上產生的。近年來,分子生物學檢測技術的方法學研究取得了進展,先后建立了各種分子生物學檢測技術。
蛋白質質譜鑒定服務
蛋白質protein是有機大分子,是構成細胞的基本有機物和生命活動的主要承擔者。蛋白質在催化生命體內各種反應進行、---、抵御外來物質入l侵及控制遺傳信息等方面都起著重要的作用。蛋白質的一級結構是---酸序列,通過鑒定---酸序列來匹配它的蛋白質,這是定性研究,是蛋白質組學的基礎,也是蛋白質組學的重要技術之一。
質譜一般由離子源、分析器mass ---yzer和離子檢測器detector三部分組成。傳統的質譜僅用于小分子揮發物質的分析,但隨著新的離子化技術的出現,如基質輔助激光解析電離飛行時間質譜(maldi-tof)和電噴霧電離質譜(esi-ms)等,質譜技術的出現為蛋白質分析提供了一種新的途徑。現在蛋白質組學基本研究手段是:以生物質譜技術為,對蛋白質進行-、高通量分離、鑒定和分析。
蛋白質質譜鑒定的基本原理是用蛋白酶將蛋白質---成肽段混合物,經maildi或esi等軟電離手段將其離子化,然后通過分析器將具有特定質核比的肽段離子分離開來。通過實際譜圖和理論上蛋白質經過蛋白酶---后產生的一級質譜峰圖和二級質譜峰圖進行的比對,進行蛋白鑒定。