分子生物學服務
公司建有100平米分子實驗室,配備有pcr儀、定量pcr儀、電泳儀、恒溫培養箱、恒溫搖床、垂直電泳儀、蛋白轉印儀、蛋白發光成像儀等設備。分子組---畢業于中國農業大學、華中科技大學同濟醫學院、浙江理工大學等高校生物醫學相關,全部具有碩士研究生以上---,熟練掌握分子生物學相關實驗,可開展多種分子生物學檢測服務。
22.同樣的od用page檢測,eb染色為什么深淺不一?
答:通常可以用eb染色的方法來判斷雙鏈dna的量(如質粒dna),因為eb可以嵌合到雙鏈dna中。而合成的單鏈dna,fish檢測,由于堿基組成不同,形成二級結構的可能性不同,eb的染色程度也會有差異,比如oligo(dt)等不形成二級結構,eb染色效果就非常差。所以不要用eb染色的方法來定量,而用紫外分光光度計檢測。同樣道理,用eb染色來照片不適合所有引物。
23.引物不純會有什么后果?
答:引物不純可能會導致:1)非特---擴增;2)無法用預先設計在引物5′端酶切位點的酶切開,---是沒有保護堿基的引物;3) 用于測序出現雙峰或亂峰。解決辦法重新合成或重新純化。
24.已經溶解的引物,為什么原先使用正常,貴州pcr,而過一段時間再使用就不好了?
答:如果溶解引物的水ph過低或污染了菌或---酶,會使引物降解。使用時沒有充分解凍混合,液體不均勻也可能會造成引物加入量不準確。建議分裝引物,避免反復凍溶。建議使用10mmt ris ph7.5緩沖液溶解引物,pcr實驗室,因為有些蒸餾水的ph值比較低ph4-5, 引物在這種條件下不穩定。還有一種可能性是引物沒有問題,而是pcr使用材料---是模板的與先前使用的不完全一致。
5.長可以合成多長的引物?
答:引物越長,出現問題的概率就越大。有的公司合成過120base的引物,產率很低。除非需要,建議合成片段長度不要超過80mer,按照目前的引物合---率,80mer的粗產品,全長還不一定正確引物的百分比不會超過40%,后續處理還有丟失很多,的產量很低。
6.需要合成多少od數?
答:根據實驗目的確定。一般pcr擴增,2 od引物,可以做200-500次50ul標準pcr反應。如果是做基因拼接或退火后做連接,實時熒光定量pcr,1 od就足夠了。但是有些研究人員,就做幾次pcr,但是卻要5-10 od。做全基因構建的引物都比較長,但是我們有些研究人員也要求高od數。片段越長, 全長得率就越低,出錯的幾率就越大。超出需要之外的od數要求,其實也是對社會資源的一種浪費,同時也從一個側面反映了部分研究人員---是新手的自信心不足,總覺得需要重復多次才能成功。