二、使用說明
1、裝載探針
對于---時間較短通常為2小時以內的細胞,先裝載探針,后用活性氧陽性對照及自己感興趣的---細胞。對于細胞---
時間較長通常為6小時以上的細胞,先用活性氧陽性對照及自己感興趣的---細胞,后裝載探針。
原位裝載探針:本方法僅適用于貼壁培養細胞。按照1:1000用無培養液稀釋dcfh-da,使終濃度為10微摩爾/升。去除細胞培養液,加入適當體積稀釋好的dcfh-da。加入的體積以能充分蓋住細胞為宜,通常對于六孔板的一個孔加入稀釋好的dcfh-da的體積為1毫升。37℃細胞培養箱內孵育20分鐘。用無細胞培養液洗滌細胞三次,以充分去除未進入細胞內的dcfh-da。
分子生物學檢測服務
隨著生命科學和化學的不斷發展,人們對生物體的認知已經逐漸深入到微觀水平。從單個的生物體到qi官到組織到細胞,再從細胞結構到---和蛋白的分子水平,pcr引物設計,人們意識到可以通過檢測分子水平的線性結構如---序列,來橫向比較不同物種,同物種不同個體,成都pcr,同個體不同細胞或不同生理病理狀態的差異。這就為生物學和醫學的各個領域提供了技術平臺。分子生物學檢測技術是現代分子生物學與分子遺傳學取得進步的結晶,是在人們對基因的結構以及基因的表達和調控等生命本---題的認識日益加深的基礎上產生的。近年來,實時熒光定量pcr,分子生物學檢測技術的方法學研究取得了進展,先后建立了各種分子生物學檢測技術。
通常活性氧陽性對照在---細胞20-30分鐘后可以---提高活性氧水平。
收集細胞后裝載探針:按照1:1000用無培養液稀釋dcfh-da,使終濃度為10微摩爾/升。細胞收集后懸浮于稀釋好的dcfh-da中,細胞濃度為一百萬至二千萬/毫升,37℃細胞培養箱內孵育20分鐘。每隔3-5分鐘顛倒混勻一下,使探針和細胞充分接觸。用無細胞培養液洗滌細胞三次,以充分去除未進入細胞內的dcfh-da。直接用活性氧陽性對照及自己感興趣的---細胞,pcr檢測,或把細胞等分成若干份后---細胞。通常活性氧陽性對照在---細胞20-30分鐘后可以---提高活性氧水平。
2.、檢測
對于原位裝載探針的樣品可以用激光共---顯微鏡直接觀察,或收集細胞后用熒光分光光度計、熒光或流式細胞儀檢測。
對于收集細胞后裝載探針的樣品可以用熒光分光光度計、熒光或流式細胞儀檢測,用激光共---顯微鏡直接觀察也可以。