步驟：(1)冷凍前24-48小時更換半量或全量培養基，使細胞處于指數生長期。(2)配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養基、，逐滴加入二--- (dmso)至20%濃度，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用。(3)離心收集培養之細胞，用加的培養基重懸起細胞，取少量細胞懸浮液(約0. 1 ml)計數細胞濃度及凍前存活率。(4)取與細胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細胞懸液，并晃動試管，制成細胞凍存懸液(dmsozui后濃度為5～10%)，使細胞濃度為1～5×106cells/ ml，混合均勻，分裝于已標示完全之冷凍保存管中，1～2 ml/vial，并取少量細胞懸浮液作污染檢測。嚴密封口后，注明細胞名稱、代數、日期。然后進行凍存。
程序降溫儀俗稱：胚胎冷凍儀是一款新型研制成功的智能型冷凍儀。該儀器采用微機控制技術，軟件，能較準確地控制液氮的施放量，從而---被凍存的生物制品以適宜的冷凍速率降溫冷凍。該儀器具有操作簡便、人機界面清楚。程序降溫儀的原理：此款設備準確地測定生物樣品的相變點， 用微機編制降溫程序，以便在樣品相變時加大液氮輸入量，克服相變樣品溫度的回升，使細胞安全而迅速地度過相變期，這是提高被凍樣品成活率的關鍵環節。
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