熒光定量pcr儀的技術原理
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所謂real-time q-pcr技術,是指在pcr反應體系中加入熒光基因,利用熒光信號累積實時監測整個pcr進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在 real-time 技術的發展過程中,兩個重要的發現起著關鍵的作用:1在90年代早期,taqdna多聚酶的5′-外切酶活性的發現,它能降解特---熒光記探針,因此使得間接的檢測pcr產物成為可能。2此后熒光雙標記探針的運用使在一密閉的反應管中能實時地監測反應全過程。這兩個發現的結合以及相應的儀器和試劑的商品化發展導致real-time q-pcr方法在研究工作中的運用。
熒光定量pcr儀的用途
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考核對乙型肝的---(hbv)、丙型肝的---(hcv) 定量分析顯示:---量與某些藥的關系。hcv高水平表達,---治作用不敏感,而hcv低滴度,---作用敏感;在治過程中,hbv-dna的血的清含量曾有下降,隨后若再度上升或超出以前水平,則提示---發生變異。
熒光定量pcr的原理
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pcr擴增時在加入一對引物的同時加入一個特---的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;剛開始時,pcr儀基因擴增儀品牌, 探針結合在dna任意一條單鏈上;pcr擴增時,taq酶的5端-3端外切酶活性將探針酶切降解,pcr儀基因擴增儀,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條dna鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與pcr產物形成完全同步。或者使用熒光染料sybr。sybr可以結合到雙鏈dna上面,當體系中的模板被擴增時,sybr可以有效結合到新合成的雙鏈上面,隨著pcr的進行,pcr儀基因擴增儀,結合的sybr染料越來越多,被儀器檢測到的熒光信號越來越強,從而達到定量的目的。
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