線粒體測序
線粒體是真核生物的重要細胞器，是生物體的能量工廠，參與能量代謝、信號轉導、細胞凋亡等許多生命活動，對生物的生理活動起著---的作用。大部分線粒體基因由于其母系遺傳特性以及進化速率較快等特點，被廣泛地用于種群遺傳學、進化生物學、譜系地理學和系統發育學、---診斷等學科領域。線粒體全基因組在生物進化的研究中具有的優勢。由于線粒體有著與真核生物長期共生的進化歷史，因此其基因組包含了反映物種進化的關鍵信息，同時，相對于核基因組，線粒體基因組小，容易對大量物種進行橫向的比較分析，有利于生物進化的研究，因而受到進化生物學家的---。線粒體的組成可以從兩個層面上反映物種及群體的遺傳和進化，即---序列組成和基因組的結構特征，兩者的特征具有不同的進化機制和進化速度，fish檢測，在進化生物學研究中可以---的互補。
注意事項
1. 為了避免蛋白---性，不要對樣品劇烈攪動和反復凍融。
2. 緩沖溶液成分盡量模擬細胞內環。。
3. 為了避免蛋白質的氧化，將 0.1～1 mmol/ldtt二硫蘇糖醇(或 β-巰加入到緩沖溶液中。
4. 為了避免重金屬對目標蛋白的破壞，四川pcr，將 1～10 mmol/ledta 金屬螯合劑加入。
5. 為了避免微生物生長，使用滅菌溶液。在純化任何一種蛋白質的時候，均必須時刻對它的穩定性注意維護，使它的活性得到保護，需要牢記如下一些通用的注意事項。
6. 盡可能置于冰上或者在冷庫內進行操作。
7. 蛋白濃度不要太稀。
8. 除非是進行---層。否則 ph 需要合適，防止所使用的緩沖溶液 ph 與 pi 相同，使蛋白質的沉淀得以避免。
9. 使用蛋白酶，避免蛋白酶對目標蛋白的降解；在純化細胞中的蛋白質時，將 dna 酶加入來使得 dna 降解，避免 dna 對蛋白的污染。
全轉錄組測序
全轉錄組是指特定組織或細胞在特定狀態下所有轉錄產物的總和，包括mrna和各種noncoding rna。我們知道生物體本身的轉錄過程是一個動態變化且十分復雜的分子作用網絡，如果只是對某個單一rna分子的研究，有時并不能準確的發現分子作用機制。而競爭性內源rna(cerna)理論闡述了一種全新的轉錄調控模式：cerna包括lncrna、circrna、mrna、假基因等分子能夠通過mirna應答元件microrna respe element， mre競爭性地結合相同的mirna來調節彼此的表達水平。舉個例子：mirna會導致基因沉默現象發生，pcr檢測，而如果lncrna競爭性結合了mirna，從而影響了mirna基因沉默功能實現。
cerna是目前轉錄調控領域的---內容之一，通過全轉錄組研究能夠系統性的闡述cerna的分子作用機制。目前對全轉錄組簡便的方法就是構建2個測序-分別進行測序。標準的生物信息學分析能夠得到mrna、lncrna、circrna、mirna各自的研究內容，靶向調控網絡、cerna網絡、共表達網絡分析可以將這幾種rna聯合起來分析，從而發現新的調控網絡模型。去除rrna的鏈特----，含有的rna信息含量十分豐富，通過測序和生物信息學分析能夠得到mrna、lncrna、circrna的鑒定及注釋信息。不過該-構建時會進行片段化選擇從而濾掉了small rna的信息，所以需要另外再構建一個small rna-，進行測序分析后可以得到mirna和其他small rna的鑒定及注釋信息。全轉錄組測序方案路線圖如下所示：
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