步驟：(1)冷凍前24-48小時更換半量或全量培養(yǎng)基，使細胞處于指數(shù)生長期。(2)配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養(yǎng)基、，逐滴加入二--- (dmso)至20%濃度，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用。(3)離心收集培養(yǎng)之細胞，用加的培養(yǎng)基重懸起細胞，恒溫試管架，取少量細胞懸浮液(約0. 1 ml)計數(shù)細胞濃度及凍前存活率。(4)取與細胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細胞懸液，并晃動試管，制成細胞凍存懸液(dmsozui后濃度為5～10%)，使細胞濃度為1～5×106cells/ ml，混合均勻，分裝于已標示完全之冷凍保存管中，1～2 ml/vial，并取少量細胞懸浮液作污染檢測。嚴密封口后，注明細胞名稱、代數(shù)、日期。然后進行凍存。
低溫生物學(cyrobiology)是研究低溫對生物所產(chǎn)生的影響及低溫在與生物有關的各個領域中應用的科學。它包括的內(nèi)容十分廣泛，幾乎所有在低于正常(生物適于生存的)溫度下進行的與生物有關的實驗研究或理論探索都屬于低溫生物學的范疇。它不僅保存我們---科幻電影中提到的人體---溫冷凍保存，也包括冷鏈食品，等。主要可以概括為以下4個方面:采用低溫科技---或者生產(chǎn)研究低溫條件下保存(保鮮)用作食物的生物材料研究利用低溫條件保存活的生物材料(包括細胞、組織、，胚胎、甚至整個生物體)以及研究低溫條件下生物的生命過程所受到的影響及生物對這類影響的適應機制。
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