蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定服務
蛋白質(zhì)protein是有機大分子，是構成細胞的基本有機物和生命活動的主要承擔者。蛋白質(zhì)在催化生命體內(nèi)各種反應進行、---、抵御外來物質(zhì)入l侵及控制遺傳信息等方面都起著重要的作用。蛋白質(zhì)的一級結構是---酸序列，通過鑒定---酸序列來匹配它的蛋白質(zhì)，這是定性研究，是蛋白質(zhì)組學的基礎，也是蛋白質(zhì)組學的重要技術之一。
質(zhì)譜一般由離子源、分析器mass ---yzer和離子檢測器detector三部分組成。傳統(tǒng)的質(zhì)譜僅用于小分子揮發(fā)物質(zhì)的分析，但隨著新的離子化技術的出現(xiàn)，如基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜(maldi-tof)和電噴霧電離質(zhì)譜(esi-ms)等，質(zhì)譜技術的出現(xiàn)為蛋白質(zhì)分析提供了一種新的途徑�，F(xiàn)在蛋白質(zhì)組學基本研究手段是：以生物質(zhì)譜技術為，對蛋白質(zhì)進行-、高通量分離、鑒定和分析。
蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定的基本原理是用蛋白酶將蛋白質(zhì)---成肽段混合物，經(jīng)maildi或esi等軟電離手段將其離子化，然后通過分析器將具有特定質(zhì)核比的肽段離子分離開來。通過實際譜圖和理論上蛋白質(zhì)經(jīng)過蛋白酶---后產(chǎn)生的一級質(zhì)譜峰圖和二級質(zhì)譜峰圖進行的比對，進行蛋白鑒定。
5.長可以合成多長的引物？
答：引物越長，出現(xiàn)問題的概率就越大。有的公司合成過120base的引物，產(chǎn)率很低。除非需要，建議合成片段長度不要超過80mer，熒光定量pcr，按照目前的引物合---率，80mer的粗產(chǎn)品，全長還不一定正確引物的百分比不會超過40%，后續(xù)處理還有丟失很多，的產(chǎn)量很低。
6.需要合成多少od數(shù)？
答：根據(jù)實驗目的確定。一般pcr擴增，2 od引物，可以做200-500次50ul標準pcr反應。如果是做基因拼接或退火后做連接，1 od就足夠了。但是有些研究人員，就做幾次pcr，但是卻要5-10 od。做全基因構建的引物都比較長，---怎么做，但是我們有些研究人員也要求高od數(shù)。片段越長， 全長得率就越低，出錯的幾率就越大。超出需要之外的od數(shù)要求，其實也是對社會資源的一種浪費，同時也從一個側面反映了部分研究人員---是新手的自信心不足，總覺得需要重復多次才能成功。
二、大腸菌群檢驗方法:
由于大腸菌群指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關的---，即:需氧及兼性厭氧、在37°c能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽胞。因此大腸菌群的檢測一般都是按照它的定義進行。 目前國內(nèi)采用的進出口食品大腸菌群檢測方法主要有和原商檢局制訂的行業(yè)標準。兩個標準方法在檢測程序上略有不同。
(一):采用三步法，即:乳糖發(fā)酵試驗、分離培養(yǎng)和證實試驗。乳糖發(fā)酵試驗:樣品稀釋后，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種三管乳糖膽鹽發(fā)酵管。36士1c培養(yǎng)48土2h，觀察是否產(chǎn)氣。分離培養(yǎng):將產(chǎn)氣發(fā)酵管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種于伊紅美藍瓊脂平板上，36士1°c培養(yǎng)18-24h，觀察菌落形態(tài)。證實試驗:挑取平板上的菌落，進行革蘭氏染色觀察。同時接種乳糖發(fā)酵管36士1°c培養(yǎng)24土2h，觀察產(chǎn)氣情況。
報告:
根據(jù)證實為大腸陽性的管數(shù)，查mpn表，報告每100ml ( g)大腸菌群的mpn值。具體操作參見gb4789. 3-94 《------食品衛(wèi)生微生物學檢驗大腸菌群測定》
(二)原商檢局制訂的行業(yè)標準，等效采用美國fda的標準方法，用于對出口食品中的大腸進行檢測。本方法采用兩步法：推測試驗:樣品稀釋后，選擇三個稀釋度，自貢pcr，每個稀釋度接種三管lst肉湯。36士1c培養(yǎng)48士2h，觀察是否產(chǎn)氣。證實試驗:將產(chǎn)氣管培養(yǎng)物接種煌綠乳糖膽鹽(bglb)肉湯管中，36士1°c培養(yǎng)48士2h，觀察是否產(chǎn)氣。以bglb產(chǎn)氣為陽性。查mpn表，報告每ml(g)樣品中大腸菌群的mpn值。具體操作參見sn0169-92《------進出口商品檢驗行業(yè)標準 出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸檢驗方法》
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