每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。研究表明，每個(gè)模板的ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的 對(duì)數(shù)存在線---，起始拷貝數(shù)越多，ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，因此只要獲得未知樣品的ct值，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出該樣 品的起始拷貝數(shù)。
pcr擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特---的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，迷你pcr儀，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；剛開(kāi)始時(shí)， 探針結(jié)合在dna任意一條單鏈上;pcr擴(kuò)增時(shí)，taq酶的5端－3端外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，迷你pcr儀，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條dna鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與pcr產(chǎn)物形成完全同步。或者使用熒光染料sybr。sybr可以結(jié)合到雙鏈dna上面，當(dāng)體系中的模板被擴(kuò)增時(shí)，sybr可以有效結(jié)合到新合成的雙鏈上面，隨著pcr的進(jìn)行，結(jié)合的sybr染料越來(lái)越多，被儀器檢測(cè)到的熒光信號(hào)越來(lái)越強(qiáng)，從而達(dá)到定量的目的。
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熒光定量pcr( realtime fluorescence quantitative pcr，rtfq pcr) 是1996 年由美國(guó)applied biosystems 公司推出的一種新定量試驗(yàn)技術(shù)，它是通過(guò)熒光染料或熒光標(biāo)記的特---的探針，迷你pcr儀公司，對(duì)pcr產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記---，實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過(guò)程，結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析，計(jì)算待測(cè)樣品模板的初始濃度。
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