rna酶rnase是導(dǎo)致rna降解主要的物質(zhì)。此酶非常穩(wěn)定，在一些---的條件下只可暫時(shí)失活，但---因素去除后又迅速恢---性。常規(guī)高溫高壓滅菌方法和蛋白抑制ji不能使所有的rnase完全失活。
1.它廣泛存在于人的皮膚上，因此制備rna時(shí)必須戴手套
2.rnase的又一污染源是取液器。根據(jù)取液器制造商的要求對取液器進(jìn)行處理。一般情況下采用以depc配制的70%---擦洗取液器的內(nèi)部和外部，可基本達(dá)到要求。
3. 塑料制品、玻璃和金屬物品的處理
1塑料制品：盡量使用---無菌塑料制品。已標(biāo)明rnase-free的塑料制品，如沒有開封使用過，通常不必再處理。
動(dòng)物組織細(xì)胞基因組dna提取
操作步驟
1. 取新鮮或冰凍動(dòng)物組織塊0.1g0.5cm3，盡量剪碎。置于玻璃勻漿器中，加入1ml的細(xì)胞裂解緩沖液勻漿至不見組織塊，轉(zhuǎn)入1.5ml 離心管中，加入蛋白酶k
500ug/ml20μl，---怎么做，混勻。在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min，也可轉(zhuǎn)入37℃水浴12～24h，間歇振蕩離心管數(shù)次。于臺(tái)式離心機(jī)以12000 rpm離心5min，取上清液入另
一離心管中。
2.加2倍體積異，倒轉(zhuǎn)混勻后，可以看見絲狀物，用100ul 吸頭挑出，---多少錢，涼干，用200ul te 重新溶解。可進(jìn)行pcr反應(yīng)等，需要進(jìn)一步純化的按下列步驟進(jìn)行
3.加等量的酚??振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。
4.取上層溶液至另一管，加入等體積的?，振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。
5. 取上層溶液至另一管，加入1/2體積的7.5mol/l氨加入2倍體積的無水---，混勻后室溫沉淀2min ，pcr，離心12000 rpm ，pcr引物設(shè)計(jì)，10min。
6.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉。
7.用1ml 70%---洗滌沉淀物1次，離心12000 rpm ， 5min。
8.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉，室溫干燥。
9.加200ul te重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?c20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
10.吸取適量樣品于genequant上檢測濃度和純度。
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