分子生物學(xué)檢測服務(wù)
隨著生命科學(xué)和化學(xué)的不斷發(fā)展，人們對(duì)生物體的認(rèn)知已經(jīng)逐漸深入到微觀水平。從單個(gè)的生物體到qi官到組織到細(xì)胞，pcr引物設(shè)計(jì)，再從細(xì)胞結(jié)構(gòu)到-和蛋白的分子水平，人們意識(shí)到可以通過檢測分子水平的線性結(jié)構(gòu)如-序列，來橫向比較不同物種，同物種不同個(gè)體，同個(gè)體不同細(xì)胞或不同生理病理狀態(tài)的差異。這就為生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域提供了技術(shù)平臺(tái)。分子生物學(xué)檢測技術(shù)是現(xiàn)代分子生物學(xué)與分子遺傳學(xué)取得進(jìn)步的結(jié)晶，pcr，是在人們對(duì)基因的結(jié)構(gòu)以及基因的表達(dá)和調(diào)控等生命本-題的認(rèn)識(shí)日益加深的基礎(chǔ)上產(chǎn)生的。近年來，分子生物學(xué)檢測技術(shù)的方法學(xué)研究取得了進(jìn)展，先后建立了各種分子生物學(xué)檢測技術(shù)。
逆轉(zhuǎn)錄---構(gòu)建及包裝
逆轉(zhuǎn)錄---retrovirus是一類rna---。在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以---rna為模板合成cdna再通過dna、轉(zhuǎn)錄、翻譯等過程形成---顆粒。逆轉(zhuǎn)錄---表達(dá)系統(tǒng)是一種新的重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)，由逆轉(zhuǎn)錄---載體、輔助載體表達(dá)---包裝需要的蛋白質(zhì)和包裝細(xì)胞系組成。逆轉(zhuǎn)錄---載體在外源基因表達(dá)、基因沉默、、生物制藥等得到廣泛的應(yīng)用。逆轉(zhuǎn)錄---載體主要優(yōu)點(diǎn)：轉(zhuǎn)染范圍廣，可以各種細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)入的外源基因可完全融合，對(duì)細(xì)胞率高，細(xì)胞不產(chǎn)生病變，可建立細(xì)胞系長期持續(xù)表達(dá)外源基因。
逆轉(zhuǎn)錄---載體系統(tǒng)共有兩部分組成：包裝細(xì)胞系和缺陷---本身。在逆轉(zhuǎn)錄---載體中，去除了正常的蛋白編碼序列而保留了和包裝信號(hào)，通過分子技術(shù)將目的基因插入此載體上，而包裝細(xì)胞系能提供---載體包裝成---粒子所需的結(jié)構(gòu)蛋白。當(dāng)重組---載體導(dǎo)入包裝細(xì)胞后，缺陷---載體和包裝細(xì)胞的互補(bǔ)作用共同完成---裝配，該---顆粒可其它宿主細(xì)胞，此時(shí)目的基因進(jìn)入該細(xì)胞并整合到細(xì)胞基因組中，pcr實(shí)驗(yàn)室，導(dǎo)致插入序列在宿主細(xì)胞中表達(dá)，產(chǎn)生目的蛋白。宿主細(xì)胞不能像包裝細(xì)胞那樣為缺失結(jié)構(gòu)基因的逆轉(zhuǎn)錄---提供結(jié)構(gòu)蛋白，因而在宿主細(xì)胞內(nèi)不會(huì)產(chǎn)生新的毒顆粒，---了該載體在生物制品領(lǐng)域的生物安全性問題。
在玻璃燒杯中注入去離子水，加入depc使其終濃度為0.05%~0.1%depc-h2o。depc二焦---為活性很強(qiáng)的物，須在通風(fēng)櫥中小心使用
將待處理的塑料制品放入一個(gè)可以高溫滅菌的容器中，注入depc-h2o，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中，在通風(fēng)柜中37℃ 或室溫下處理過夜。
將depc-h2o小心倒入廢液瓶中，熒光定量pcr，將裝有depc- h2o 處理過的塑料制品的容器以鋁箔封口，高溫高壓蒸汽滅菌至少30分鐘。
滅菌塑料制品烘烤干燥，置潔凈處備用。
玻璃和金屬物品250 ℃烘烤3小時(shí)以上。
登錄后臺(tái)
