磁性細胞標記方式
應用macs技術進行磁性細胞分選重要的一點是高的標記。要盡可能地增強陽性細胞的標記，并減弱背景染色。有兩種基本的磁性標記方式:直接標記和間接標記。
1、直接磁性細胞標記(direct ---ic cell labeling)
(磁珠結合的細胞就是所要分離獲得的細胞)直接標記是快速、zui特異的磁性標記方法。目前有多種分選人、小鼠、大鼠以及非人類靈長類細胞的macs直標微珠可供選用。
2、間接磁性細胞標記(indirect ---ic cell labeling )
(磁珠結合不需要的細胞，游離于磁場的細胞為所需細胞)間接磁性細胞標記需要聯合使用單ke隆或者多ke隆抗ti和macs間標微珠。未結合抗ti、生物素化抗ti或者熒光素標記抗ti均可作為一抗標記細胞，再使用抗免yi球蛋白微珠、抗生物素或鏈霉親和素微珠、抗熒光素微珠作為二抗磁性標記細胞。幾乎針對任何種系任何細胞的任何一種單抗或多抗，均可用于間接標記。間接標記主要在如下情況時選用:當沒有直標磁珠時;需要用幾種抗ti的混合物同時分選或去除多種類型的細胞;間接標記有放大作用，因此可在磁性分選抗原表達弱的目的細胞時使用;使用自備或者配體的磁珠分選中。( -般而言，陰性分離法的磁珠用量比陽性分離法的大，陽性分離法用行更多。)
成纖維細胞分離方法
1.處死孕鼠，全身置于75%酒精里浸泡，然后在超凈臺中用剪刀和鑷子將孕鼠皮膚剪開，用另外- -組剪刀、鑷子剪開腹部肌層，露出，后用第三組剪刀和鑷子將小心取出放在盛有d-pbs的玻璃平皿中，沖洗去血。
2.用兩把彎鑷子將胚胎外的胞膜小心去除，然后夾掉頭和內臟，將其余胚胎轉移到一個裝有30 ml d-pbs的50 ml離心管中，河南細胞，輕輕顛倒兩次，倒掉d-pbs，再重復此步驟一次，注意要留少許d-pbs，然后將胚胎轉移到另- -裝有d-pbs的平皿中，并用手術刀片將其細細切碎。
3. 用200 μ的移液槍反復、快速地吹打平皿中的液體，轉移至15 ml離心管中，于4c 1500 rpm離心5分鐘，倒掉上清，以10 ml胰酶重懸沉淀，放在37c水浴中---30分鐘，且每隔五分鐘輕輕晃動，使之充分---。
4.將上層細胞懸液倒入一個裝有10 ml mef生長培養基的50 ml離心管中，用200目的尼龍網過濾后，以1500 rpm離心5分鐘收集細胞，再用30 ml mef生長培養基洗滌兩次。
5.細胞沉淀用15 ml mef生長培養基重懸后進行細胞計數(- -般8只14天的胎鼠可獲得2-3x107細胞)。
6. 3x106細胞懸浮于15 ml mef生長培養基中，接種到200 ml培養瓶中。
7. 24小時后更換新鮮的mef生長培養基。
8.細胞長滿后，---，先用d-pbs沖洗，倒掉后加胰酶---(此步時間不宜過長，作者- -般不超過五分鐘)，按1:5傳代。
9. 細胞再次長到覆蓋率80-90%左右， 將其---后，常規凍存(凍存液要現配)。
細胞傳代培養
操作步驟
1.將長滿細胞的培養瓶中原來的培養液棄去。
2、加入0.5- -1ml 0.25%胰酶溶液，使瓶底細胞都浸入溶液中。
3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移，原貼壁的細胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時將胰酶棄去，加入10m培養液終止---。觀察---也可以用肉眼，細胞生物學實驗，當見到瓶底發白并出現細zhen孔空隙時終止---。一般室溫---時間約為1- -3分鐘。
4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液，分到另外兩到三瓶中，實踐培養液塞好橡皮塞，置37°c下繼續培養。第二天觀察貼壁生長情況。
附:---液配制方法:
稱取0.25克胰酶蛋白酶(活力為1 : 250)， 加入100ml無ca2+、mg2+的hanks液溶解，濾器過濾chu菌，4°c保存，用前可在379c下回溫。胰酶溶液中也可加入edta，使zui終濃度達0.02%。
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