磁性細胞標記方式
應用macs技術進行磁性細胞分選重要的一點是高的標記。要盡可能地增強陽性細胞的標記,并減弱背景染色。有兩種基本的磁性標記方式:直接標記和間接標記。
1、直接磁性細胞標記(direct ---ic cell labeling)
(磁珠結合的細胞就是所要分離獲得的細胞)直接標記是快速、zui特異的磁性標記方法。目前有多種分選人、小鼠、大鼠以及非人類靈長類細胞的macs直標微珠可供選用。
2、間接磁性細胞標記(indirect ---ic cell labeling )
(磁珠結合不需要的細胞,游離于磁場的細胞為所需細胞)間接磁性細胞標記需要聯合使用單ke隆或者多ke隆抗ti和macs間標微珠。未結合抗ti、生物素化抗ti或者熒光素標記抗ti均可作為一抗標記細胞,再使用抗免yi球蛋白微珠、抗生物素或鏈霉親和素微珠、抗熒光素微珠作為二抗磁性標記細胞。幾乎針對任何種系任何細胞的任何一種單抗或多抗,均可用于間接標記。間接標記主要在如下情況時選用:當沒有直標磁珠時;需要用幾種抗ti的混合物同時分選或去除多種類型的細胞;間接標記有放大作用,流式細胞,因此可在磁性分選抗原表達弱的目的細胞時使用;使用自備或者配體的磁珠分選中。( -般而言,陰性分離法的磁珠用量比陽性分離法的大,陽性分離法用行更多。)
大鼠shen小球內皮細胞分離培養
2.原代細胞培養:(1)shen臟原位灌洗:sd大鼠用25%烏拉坦腹整注-zui后仰臥固定。胸腹部消森并分離胸主動脈,以無菌的冷hank液漱朱洗血.同時剪破shen靜脈利于液體流出。1-2min后shen臟色澤變白,取出雙shen冰浴保存。
(2)shen小球分離:參照green等方法改進。將灌洗后的shen臟撕下shen被膜.去除髓質后將皮質剪成約1-2mm的碎塊,輕碾shen皮質依次通過80.120和200目鋼篩。收集shen小球。
(3)shen小球---和培養;將提取的shen小球加人0.1% in 型膠原酶---后收集沉淀。以2x10* 的shen小球數接種于鋪有1%明膠培養瓶內,加a配制好的內皮細胞培養液(mfm.hepes 20 mmnovl 20%胎牛xue清0. 66 u---/ml.血管內皮生長因子20 ng /ml、---鈉100 u/ml.青莓su100 u/ml、鏈霉su100 μ/ml) .靜止培養3 d后逐日觀察shen小球的貼壁情況。待shen小球充分貼壁后常規換液.第3同進行純化。
---檢測
本公司應用mtt比色法, 檢測細胞存活和生長。其檢測原理為huo細胞內線粒體中的---脫氫酶能催化外源性無色的mtt形成藍色的結晶formazan,并沉積在細胞中,而---無此功能。二jia基---dmso能溶解細胞中的formazan,用酶聯mian疫檢測儀在一定波長處測定其光吸收值,吉林細胞,可間接反映huo細胞數量。在一定細胞數范圍內,mtt結晶形成的量與細胞數成正比。
該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、-的抗腫liu藥wu篩選、細胞毒性試驗、以及腫liu放she敏感性測定等。服務內容 1. 細胞接種:收到客戶細胞后,癌細胞,我們會用細胞計數板計數細胞,得出細胞懸液濃度。計算出應稀釋的倍數,按mtt試劑盒要求在96孔板內接種 相應濃度的細胞懸液;
2. 細胞培養:然后在無菌恒溫細胞培養箱內培養接種好的96孔細胞培養板,并實時觀察細胞狀態;
3. yao物處理并呈色:按不同濃度梯度加入yao物作用細胞;
4. 溶解,流式細胞技術,比色:加入mtt檢測試劑,按操作要求孵育相應時間,在mei標儀內檢測對照組和實驗組的吸光值。并處理數據得出比色結果。