southern雜交
實驗原理
southern印跡雜交southern blot是1975年由英---southern創建，是研究dna圖譜的基本技術。southern印跡雜交是進行基因組dna特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經---性內切酶---的dnal片段，將膠上的dna變性并在原位將單鏈dnal片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上，經干烤或者紫外線照射固定，再與相對應結構的標記探針進行雜交，用放l射自顯影或酶反應顯色，從而檢測特定dna分子的含量。
動物組織細胞基因組dna提取
操作步驟
1. 取新鮮或冰凍動物組織塊0.1g0.5cm3，盡量剪碎。置于玻璃勻漿器中，加入1ml的細胞裂解緩沖液勻漿至不見組織塊，轉入1.5ml 離心管中，---，加入蛋白酶k
500ug/ml20μl，混勻。在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min，也可轉入37℃水浴12～24h，間歇振蕩離心管數次。于臺式離心機以12000 rpm離心5min，取上清液入另
一離心管中。
2.加2倍體積異，倒轉混勻后，可以看見絲狀物，用100ul 吸頭挑出，涼干，用200ul te 重新溶解。可進行pcr反應等，需要進一步純化的按下列步驟進行
3.加等量的酚??振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。
4.取上層溶液至另一管，加入等體積的?，振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。
5. 取上層溶液至另一管，加入1/2體積的7.5mol/l氨加入2倍體積的無水---，---多少錢，混勻后室溫沉淀2min ，離心12000 rpm ，10min。
6.小心倒掉上清液，pcr實驗室，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉。
7.用1ml 70%---洗滌沉淀物1次，離心12000 rpm ， 5min。
8.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，廣西pcr，將附于管壁的殘余液滴除掉，室溫干燥。
9.加200ul te重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?c20℃保存備用。
10.吸取適量樣品于genequant上檢測濃度和純度。
凝膠阻滯遷移電泳檢測服務emsa
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