蛋白提取
大部分蛋白質都可溶于水、稀鹽、稀酸或堿溶液, 少數與脂類結合的蛋白質則溶于---、---等有ji溶劑中,因些,-,可 采用不同溶劑提取分離和純化蛋白質及酶。
(一)水溶液提取法
稀鹽和緩沖系統的水溶液對蛋白質穩定性好、溶解度大、是提取蛋白質常用的溶劑,pcr引物設計,通常用量是原材料體積的1-5倍,實時熒光定量pcr,提取時需要均勻的攪拌,以利于蛋白質的溶解。提取的溫度要視有效成份性質而定。一方面,多數蛋白質的溶解度隨著溫度的升高而增大,因此,溫度-于溶 解,縮短提取時間。但另一方面. ,溫度升高會使蛋白---性失活,因此,基于這一點考慮提取蛋白質和酶時一般采用低溫( 5度以下)操作。為了避免蛋白質提以過程中的降解,可加入蛋白 水解酶抑zhi劑(如二yi------,云南pcr,碘yi酸等)。
分子實驗介紹——熒光檢測
細胞熒光染色是以熒光物質標記而進行抗原定位的技術。在細胞中,通過特定的標記,可以檢測目的蛋白表達量和表達定位。是細胞中的可直觀觀察細胞內蛋白定位和表達的實驗方法。
實驗流程:細胞固定-細胞膜破膜-蛋白封閉-目的蛋白結合-熒光二抗結合-dapi染色-熒光顯微鏡拍照或激光共-顯微鏡拍照。
結果示例:
細胞熒光染
通過觀察細胞中蛋白的熒光強度和定位分析該蛋白的表達變化。
轉錄組測序
轉錄組即某個物種或特定細胞在某一功能狀態下產生的rna的總和,是研究細胞表型和功能的一個重要手段。與基因組不同的是,轉錄組的定義中包含了時間和空間的限定。同一細胞在不同的生長時期及生長環境下,其基因表達情況是不相同的。轉錄組測序rna-seq是指利用---代高通量測序技術進行cdna測序,快速地獲取某一物種特定qi官或組織在某一狀態下的轉錄本。相對于傳統芯片而言,rna-seq無需預先設計探針,即可對物種的細胞類型的轉錄組進行檢測,能夠提供較的數字化信號,更高的檢測通量以及更廣泛的檢測范圍,是目前深入研究轉錄組復雜性的---工具。