脂質體瞬時轉染
1、細胞h9c2 (hela) 6孔板hela1x10°/孔。
2、轉染前換上沒有抗sheng素的dmem+胎清(10%)。
3、將質粒dna (約2-4ul) 2ul 加入dorf管中+dmem至50u1。
4、脂質體5ul補培養基至50ul混勻靜止5分鐘(質粒與脂質體比例為1:2或1.5:2.5)。
5、將含有脂質體的培養基與含質粒的混合總體積100ul室溫放置30分鐘。
6、吸取混合物均勻加入每一個孔中。
7、將6孔板放入培養箱中繼續培養6小時后吸出培養基換上新配置的培養基dmem6ml+胎清600u1+三抗300u1。
8、培養24小時。
血管生成技術
一、服務介紹
zhong瘤血管生成是一個極其復雜的過程，一般包括包括血管內皮基質降解、內皮細胞移行、內皮---、內皮細胞管道化分支形成血管環和形成新的基底膜等步驟。由于zhong瘤組織這種新生血管結構及功能異常，且血管基質不完善，這種微血管容易發生滲漏，細胞實驗，因此腫liu細胞不需經過復雜的侵襲過程而直接穿透到血管內進入血流并在遠隔部位形成轉移。
血管生成angiogenesis是指源于已存在的mao細血管和毛xi血管后微靜脈新的mao細血管性血管的生長。無論原發性zhong瘤還是繼發性zhong瘤，一旦生長直徑超過1~2 mm，細胞實驗外包，都會有血管生成。這是由于zhongt瘤細胞自身可分泌多種生長因子，-血管生成。
小鼠精原gan細胞分離富集和培養
成年小鼠gao丸中約有108個細胞，其中約有 2×104個是精原gan細胞，僅占gao丸生精上皮細胞總數的 0.02～0.03%，精原gan細胞數量太少不利于體外培養.分離和富集精原gan細胞成為精原gan細胞體外培養能否成功的前提條件.尋找分離和富集小鼠精原gan細胞有效方法. 方法:出生6-8天小鼠為實驗對象，先用0.25%胰酶1mm edta---gao丸10min，用胎牛xue清終止---，用一次40-um孔徑的濾器過慮制成單 細胞懸液，30%percoll不連續密度梯度法離心富集精原gan細胞，陜西細胞，再根椐未分化精原gan細胞表面thy1.2(cd90.2)陽性cd117(c- kit)陰性特點用流式細胞儀將精原gan細胞分選出來，并在體外進行培養嘗試. 結果:30%percoll密度梯度離心前cd117(c-kit)陽性細胞占13.80±3.34%，cd90.2陽性細胞占28.98±4.51%， 二者都陽性細胞占8.98±2.98%，cd117陰性cd90.2陽性細胞占18.36±2.67%;離心后 cd117(c-kit)陽性細胞占12.37±3.34%，cd90.2陽性細胞占56.98±4.51%，二者都陽性細胞占 8.20±3.98%，cd117陰性cd90.2陽性細胞占32.36±3.67%;cd117(c-kit)陽性細胞和二者都陽性細胞所占百分比前后 比較差異無---性(p>;0.1)，cd90.2陽性細胞和cd117陰性和cd90.2陽性細胞所占百分比前后比較差異有---性 (p<0.05);采用cd117和cd90.2作為標志分子，percoll離心后細胞懸液經facs分選后獲得細胞純度
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