平板克l隆形成實驗基本步驟::
1、取對數(shù)生長期的各組細(xì)胞，分別用0.25%胰 蛋白酶---并吹打成單個細(xì)胞，---實驗，并把細(xì)胞懸浮在10%胎牛的dmem培養(yǎng)液中備用。
2、將細(xì)胞懸液作梯度倍數(shù)稀釋，每組細(xì)胞分別以每皿50、100、200 個細(xì)胞的梯度密度分別接種含10ml 37預(yù)溫培養(yǎng)液的皿中，并輕輕轉(zhuǎn)動，使細(xì)胞分散均勻。置37團5% co2及飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2~3周。
3、經(jīng)常觀察，流式細(xì)胞檢測結(jié)果分析，當(dāng)培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見的時，終止培養(yǎng)。棄去上清液，用pbs小心浸洗2次。加4%---固定細(xì)胞5ml固定15分鐘。然后去固定液，加適量gimsa應(yīng)用染色液染10~30分鐘，然后用流水緩慢洗去染色液，空氣干燥。
4、將平皿倒置并疊加一張帶網(wǎng)格的透明膠片，用肉眼直接計數(shù)，或在顯微鏡(低倍鏡)計數(shù)大于10個細(xì)胞的數(shù)。后計算形成率。形成率= (數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) x100%平板形成試驗方法簡單，適用于貼壁生長的細(xì)胞。適宜底物為玻璃的、塑料瓶皿。試驗成功的關(guān)鍵是細(xì)胞懸液的制備和接種密度。細(xì)胞一定要分散得好，不能有細(xì)胞團，接種密度不能過大。平板形成試驗方法簡單，適用于貼壁生長的細(xì)胞。適宜底物為玻璃的、塑料瓶皿。試驗成功的關(guān)鍵是細(xì)胞懸液的制備和接種密度。細(xì)胞- -定要分散得好，不能有細(xì)胞團，接種密度不能過大。
yao物對細(xì)胞的ic50檢測
ic50 (half maximal inhibitory concentration)是指被測量的拮抗劑的半抑制濃度。它能指示某一yao物或者物質(zhì)(yi制劑)在抑制某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物質(zhì)，比如酶，細(xì)胞受體或是微生物)的半量。在凋亡方面，可以理解為一定濃度的某種藥wu-腫liu細(xì)胞凋亡50%，該濃度稱為50%抑制濃度，即凋亡細(xì)胞與全部細(xì)胞數(shù)之比等于50%時所對應(yīng)的濃度，ic50值可以用來衡量yao物-凋亡的能力，即-能力越強，該數(shù)值越低，當(dāng)然也可以反向說明某種細(xì)胞對yao物的耐受程度。
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