細胞實驗介紹——流式細胞術檢測細胞周期和凋亡
流式細胞術檢測細胞周期：
細胞周期：指細胞從---次分裂結束起到下一次分裂結束為止的活動過程，通常由g0/g1期、s期、g2期和m期組成。g0/g1期：有絲分裂發生，細胞分裂成兩個細胞，進入下一個細胞周期，或者進入靜止期g0期，而g0期從dna含量上無法與g1期區分，細胞開始rna和蛋白質的合成，但dna含量仍保持二倍體。s期：dna開始合成，細胞核內dna的含量介于g1期和g2期之間。g2期和m期：當dna成為4倍體時，細胞進入g2期。g2期細胞繼續合成rna及蛋白質，直到進入m期。
pi法是---的周期檢測方法。pi為插入性-熒光染料，能選擇性的嵌入-dna和rna雙鏈螺旋的堿基之間與之結合，其結合的量與dna的含量成正比例關系，用流式細胞儀進行分析，就可以得到細胞周期各個階段的dna分布狀態，從而計算出各個期的百分含量。
一般流程：細胞收集-70%酒精固定過夜-pi染色-流式細胞儀檢測。
細胞凋亡：細胞凋亡的早期就有細胞膜表面破損發生。破損時凋亡細胞表面的磷脂腺絲氨酸(ps)可以從細胞內膜翻轉至細胞的外膜。該過程發生在之前，檢測ps的表達，能反映早期凋亡。annexinv是ca2+依賴的磷脂結合蛋白，對ps有---的親和性，并且可以與暴露于細胞外的ps相結合。利用這一原理，可以將annexinv標記熒光來識別早期的細胞凋亡。通常利用annexinv-fitc和碘化丙啶(pi)來區分凋亡和壞---。pi的膜通透性很差，transwell細胞共培養，因而只能標記壞死的細胞。
一般流程：細胞收集-pi-annexinv標記-流式細胞儀檢測。
結果示例：
圖 a 細胞周期檢測圖；b 細胞凋亡檢測圖
細胞生物學服務
南京英瀚斯生物科技公司自建有標準的細胞培養房，配備有生物安全柜、超凈工作臺、細胞三氣培養箱、---細胞培養箱、熒光倒置顯微鏡、體視鏡、、流式細胞儀等設備。細胞組---畢業于東南大學、華中科技大學等高校生物學相關，具有碩士研究生以上---，細胞3d培養，熟練掌握細胞學相關實驗，可開展多種細胞實驗。
小鼠成骨細胞和破骨細胞共培養模型的建立
細胞之間的相互調控作用奠定基礎.方法利用24 h內新生小鼠顱骨和4~8周齡成年小鼠四肢長分別分離、培養成骨細胞和破骨細胞，磁珠細胞分選，采用間接接觸的培養模式將接種了骨sui單核細胞的玻片或骨片置入提前24 h接種了成骨細胞的培養皿中進行共培養.共培養-定時間后進行破 骨細胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase，trap染色鑒定和骨吸收功能檢測，并進一 步采用rt- pcr對破骨細胞標志酶基因基質金屬蛋白酶.9(mmp-9)、trap 和組織蛋白酶k (cathepsin k )的表達進行檢測結果共培養5天后---trap(+)多核細胞形成13天trap(+ )多核細胞數目達到高峰;骨吸收陷窩在共培養7天后開始出現，雅安細胞，隨著培養時間的延長，陷窩面積呈增加趨勢;破骨細胞標志基因trap在共培養3天時開始表達，而mmp-9和cathepsin k則在共培養5天后表達結論共培養體系中成骨細胞對破骨細胞調控作用----的破骨細胞具有噬骨能力，該共培養模型可用于成骨細胞和破骨細胞之間的相互調控作用研究.
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