關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)的常見(jiàn)問(wèn)題:
q: 細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)碎片如何處理？
a: 貼壁細(xì)胞在移除原培養(yǎng)液后，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)，用 pbs 沖洗 2-3 遍；懸浮細(xì)胞離心移除原培養(yǎng)液后，加入 pbs 重懸，離心移除 pbs; 一般建議重復(fù)上述步驟 2-3 遍，用 800-1000rpm 離心 3-5 分鐘。
q：細(xì)胞凍存能放在 -80℃ 保存嗎？
a：長(zhǎng)期保存的細(xì)胞應(yīng)當(dāng)放在液氮-196℃中保存，短時(shí)間一般 1 周-2 周可以存放在 -80℃。
q：培養(yǎng)瓶是用密封蓋好，還是用透氣蓋好？
a：都可以。只是在使用密封蓋培養(yǎng)瓶時(shí)，瓶蓋旋至約 2/3，不要完全擰緊，-，預(yù)留約 1/3 以便細(xì)胞可以透氣；有些品牌的密封蓋培養(yǎng)瓶的瓶蓋上有適合位置指示標(biāo)志。
q:何謂 fbs，fcs，cs，hs?
a: fetal bovine serum(fbs)和 fetal calf serum(fcs)之間沒(méi)有區(qū)別，都是指胎牛；fcs 不是正規(guī)命名，盡量不使用。calf serumcs則是指小牛。horse serum(hs)則是指馬。
自噬(autophagy)是細(xì)胞受到-后吞噬自身的細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞器，終將吞食物在溶酶體內(nèi)降解的過(guò)程，自噬體(autophagosome)為雙層膜包被的圓形或橢圓形結(jié)構(gòu)，內(nèi)含細(xì)胞質(zhì)、長(zhǎng)壽蛋白質(zhì)和異常蛋白-物，損傷或多余細(xì)胞器如線(xiàn)粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和微體、
-和-等。單丹-尸胺(dansylcadaverine，mdc是一種熒光色素，是嗜酸性染色劑，通常被于檢測(cè)自噬體形成的特-標(biāo)記染色劑，其檢測(cè)激發(fā)濾光片波長(zhǎng)355nm ，阻斷濾光片波長(zhǎng)512nm。leagene mdc染色液適用于培養(yǎng)細(xì)胞的自噬染色，可與eb合用雙染。
平板克l隆形成實(shí)驗(yàn)基本步驟::
1、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的各組細(xì)胞，流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，分別用0.25%胰 蛋白酶-并吹打成單個(gè)細(xì)胞，并把細(xì)胞懸浮在10%胎牛的dmem培養(yǎng)液中備用。
2、將細(xì)胞懸液作梯度倍數(shù)稀釋?zhuān)拷M細(xì)胞分別以每皿50、100、200 個(gè)細(xì)胞的梯度密度分別接種含10ml 37預(yù)溫培養(yǎng)液的皿中，并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，使細(xì)胞分散均勻。置37團(tuán)5% co2及飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2~3周。
3、經(jīng)常觀察，當(dāng)培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的時(shí)，陜西細(xì)胞，終止培養(yǎng)。棄去上清液，用pbs小心浸洗2次。加4%-固定細(xì)胞5ml固定15分鐘。然后去固定液，加適量gimsa應(yīng)用染色液染10~30分鐘，然后用流水緩慢洗去染色液，空氣干燥。
4、將平皿倒置并疊加一張帶網(wǎng)格的透明膠片，用肉眼直接計(jì)數(shù)，或在顯微鏡(低倍鏡)計(jì)數(shù)大于10個(gè)細(xì)胞的數(shù)。后計(jì)算形成率。形成率= (數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) x100%平板形成試驗(yàn)方法簡(jiǎn)單，適用于貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞。適宜底物為玻璃的、塑料瓶皿。試驗(yàn)成功的關(guān)鍵是細(xì)胞懸液的制備和接種密度。細(xì)胞一定要分散得好，不能有細(xì)胞團(tuán)，接種密度不能過(guò)大。平板形成試驗(yàn)方法簡(jiǎn)單，適用于貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞。適宜底物為玻璃的、塑料瓶皿。試驗(yàn)成功的關(guān)鍵是細(xì)胞懸液的制備和接種密度。細(xì)胞- -定要分散得好，不能有細(xì)胞團(tuán)，接種密度不能過(guò)大。
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