mirna測序
microrna(mirna)是一種大小約21—23個堿基的單鏈小分子rna，是由具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的約70-90個堿基大小的單鏈rna前體經(jīng)過dicer酶加工后生成，不同于sirna雙鏈但是和sirna密切相關(guān)。microrna通過和靶基因mrna堿基配對引導(dǎo)沉默復(fù)合體risc降解mrna或抑制mrna的翻譯，從而在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控蛋白表達(dá)新發(fā)現(xiàn)mirna也能在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控基因表達(dá)。mirna在物種進(jìn)化中相當(dāng)保守，在動物、植物和-等中發(fā)現(xiàn)的mirna表達(dá)均有嚴(yán)格的組織特-和時序性。mirna在細(xì)胞生長和發(fā)育過程中起多種作用，包括調(diào)控發(fā)育、分化、凋亡和增殖等。
目前研究mirna的方法主要是realtime-pcr、生物芯片技術(shù)以及第二代測序技術(shù)。基于第二代測序技術(shù)的mirna測序，可以一次獲得數(shù)百萬條mirna序列，咸陽pcr，能夠快速鑒定出不同組織、不同發(fā)育階段、不同-狀態(tài)下已知和未知的mirna及其表達(dá)差異，為研究mirna對細(xì)胞進(jìn)程的作用及其生物學(xué)影響提供了有力工具。
rna pull down 檢測
rna
18.引物是經(jīng)過page純化的，為什么還有堿基缺失或插入？
答：理論-析型page變性電泳，可以區(qū)分引物之間一個堿基的差別。但是制備page電泳，上樣量都是非常大，電泳時的條帶非常寬，帶與帶之間有重疊，分辨率已下降，fish檢測，電泳后割帶回收目的引物時，-多少錢，很難說不割到差別僅幾個堿基的引物。國內(nèi)有一個不好的現(xiàn)象，page純化的引物，-是長引物要的量都比較高，-，導(dǎo)致割的條帶有時可能比較寬。建議：您如果減少od數(shù)，引物遇到的問題可能就會少一些。
19. taqman 探針設(shè)計(jì)的基本原則是什么？
答：下列原則供您參考。
◆taqman 探針位置盡可能靠近擴(kuò)增引物擴(kuò)增產(chǎn)物50-150bp，但不能與引物重疊。
◆長度一般為18-40mer 。
◆g-c含量控制在40-80%左右。
◆避免連續(xù)相同堿基的出現(xiàn)，-是要避免gggg或更多g出現(xiàn)。
◆在引物的5端避免使用g。
◆選用比較多的堿基c。
◆退火溫度tm控制在 68-70c 左右。
有用的熒光染料參數(shù)
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