目的
學習和掌握外源基因?qū)胝婧思毎闹饕椒ā|(zhì)體介導的轉(zhuǎn)染。了解外源基因進入的一般性方法,觀測外源蛋白的表達綠色熒光蛋白,為染色準備實驗材料。
實驗原理
上圖所示是脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染的示意圖,它顯示了外源質(zhì)粒進入細胞的一般過程。
外源基因進入細胞主要有四種方法:法、磷酸鈣法和脂質(zhì)體介導法和-介導法。法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質(zhì)粒進入;磷酸鈣法和脂質(zhì)體法是利用不同的載體物質(zhì)攜帶質(zhì)粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞;-法是利用包裝了外源基因的-細胞的方法使得其進入細胞。但是由于法和磷酸鈣法的實驗條件控制較嚴、難度較大;-法的前期準備較復雜、而且可能對于細胞有較大影響;所以現(xiàn)在對于很多普通細胞系,細胞實驗室,一般的瞬時轉(zhuǎn)染方法多采用脂質(zhì)體法。
利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法重要的就是防止其毒性,因此脂質(zhì)體與質(zhì)粒的比例,細胞密度以及轉(zhuǎn)染的時間長短和培養(yǎng)基中的含量都是影響轉(zhuǎn)染效率的重要問題,通過實驗摸索的合適轉(zhuǎn)染條件對于效率的提高有-的作用。
雜交瘤細胞基因測序
雜交瘤細胞有丟失高特-高活性的風險,或者細胞狀態(tài)不好乃至。而經(jīng)過雜交瘤測序,可以獲得相應的序列,可以以重組蛋白的方式來穩(wěn)定獲得;從而使得研發(fā)或生產(chǎn)者不必以雜交瘤細胞為載體保留該,而可以以堿基序列的形式進行保存和傳播交流、鑒定。同時還可以使用獲得的測序結(jié)果進行等-方面的申請審批。有時為了進一步-生產(chǎn)或進行人源化等生物工程操作/修飾,有-了解雜交瘤所表達的對應的基因序列以進一步進行生物工程操作與生產(chǎn)。
相較于直接對進行基于蛋白質(zhì)分析的測序相比,得益于基因測序技術(shù)的發(fā)展,雜交瘤測序可以提供的結(jié)果,防止蛋白測序中如亮氨酸/異亮氨酸較難區(qū)分等潛在風險。