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細胞系-眉山細胞-南京英瀚斯

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時間
議定
2023-4-13  
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cell counting kit-8簡稱cck-8是一種基于wst-8的廣泛應用于-和細胞毒性的檢測試劑。wst-8【化學名:2-(2-甲氧ji-4-硝ji-ji)-3-(4-硝ji-ji)-5-(2,4-二磺酸-)-2h-四唑單鈉鹽】,是一種類似于mtt的化合物,細胞系,它在電子載體1-甲氧ji-5-甲ji吩-鎓-二jia酯1-methoxy pms存在的情況下,被線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的橙黃色甲瓚產(chǎn)物formazan。-越多越快,顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺,眉山細胞,對于同樣的細胞,顏色的深淺與活xi胞的數(shù)量成正比,因此可利用這一特性直接進行-和毒性分析。




細胞轉(zhuǎn)染實驗

目的

學習和掌握外源基因?qū)胝婧思毎闹饕椒ā|(zhì)體介導的轉(zhuǎn)染。了解外源基因進入的一般性方法,觀測外源蛋白的表達綠色熒光蛋白,為染色準備實驗材料。


實驗原理



上圖所示是脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染的示意圖,它顯示了外源質(zhì)粒進入細胞的一般過程。

外源基因進入細胞主要有四種方法:法、磷酸鈣法和脂質(zhì)體介導法和-介導法。法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質(zhì)粒進入;磷酸鈣法和脂質(zhì)體法是利用不同的載體物質(zhì)攜帶質(zhì)粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞;-法是利用包裝了外源基因的-細胞的方法使得其進入細胞。但是由于法和磷酸鈣法的實驗條件控制較嚴、難度較大;-法的前期準備較復雜、而且可能對于細胞有較大影響;所以現(xiàn)在對于很多普通細胞系,細胞實驗室,一般的瞬時轉(zhuǎn)染方法多采用脂質(zhì)體法。

利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法重要的就是防止其毒性,因此脂質(zhì)體與質(zhì)粒的比例,細胞密度以及轉(zhuǎn)染的時間長短和培養(yǎng)基中的含量都是影響轉(zhuǎn)染效率的重要問題,通過實驗摸索的合適轉(zhuǎn)染條件對于效率的提高有-的作用。



雜交瘤細胞基因測序

雜交瘤細胞有丟失高特-高活性的風險,或者細胞狀態(tài)不好乃至。而經(jīng)過雜交瘤測序,可以獲得相應的序列,可以以重組蛋白的方式來穩(wěn)定獲得;從而使得研發(fā)或生產(chǎn)者不必以雜交瘤細胞為載體保留該,而可以以堿基序列的形式進行保存和傳播交流、鑒定。同時還可以使用獲得的測序結(jié)果進行等-方面的申請審批。有時為了進一步-生產(chǎn)或進行人源化等生物工程操作/修飾,有-了解雜交瘤所表達的對應的基因序列以進一步進行生物工程操作與生產(chǎn)。

相較于直接對進行基于蛋白質(zhì)分析的測序相比,得益于基因測序技術(shù)的發(fā)展,雜交瘤測序可以提供的結(jié)果,防止蛋白測序中如亮氨酸/異亮氨酸較難區(qū)分等潛在風險。






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