dna測序檢測
1. pcr測序反應(yīng)
(1)取0.2ml的pcr管，用記號筆編號，將管插在顆粒冰中，pcr，按下表加試劑:
所加試劑測定模板管標(biāo)準(zhǔn)對照管
bigdye mix
1μl
1μl
待測的質(zhì)粒dna
1μ 1
pgem-3zf (+)雙鏈dna
-1μ1
待測dna的正向引物
1μ 1
m13(-21)引物- 1μ 1
滅菌去離子水
2μ 1
2μ 1
總反應(yīng)體積5μ 1，不加輕礦物油或石蠟油，德陽pcr，蓋緊pcr管，用手指彈管混勻，稍離心。
(2)將pcr管置于9600或2400型pcr儀.上進(jìn)行擴(kuò)增。98c變性2min后進(jìn)行pcr循環(huán)，
pcr循環(huán)參數(shù)為96c 10s， 50c 5s， 60°c4min， 25 個循環(huán)，擴(kuò)增結(jié)束后設(shè)置4c保溫。
2.-法純化pcr產(chǎn)物
(1) 將混合物離心，將擴(kuò)增產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到1.5ml ep管中。
(2)加入25μ 1/-混合液，充分振蕩，置冰上10min以沉淀dna。12 000r/min于
4c離心30 min，小心棄上清。
(3)加70%(v/v)的-50μ 1 洗滌沉淀2次。12 000r/min 于4c離心5min，小心棄上清和
管壁的液珠，真空干燥沉淀10~ 15min。
3.電泳前測序pcr產(chǎn)物的處理。
(1)加入12μ 1的tsr于離心管中，劇烈振蕩，讓其充分溶解dna沉淀，稍離心。
(2)將溶液轉(zhuǎn)移至蓋體分離的0.2ml pcr管中，稍離心。
(3)在pcr儀上進(jìn)行熱變性(95c 2min)，冰中驟冷，待_上機(jī)。
4..上機(jī)操作按儀器操作說明書安裝毛細(xì)管，進(jìn)行毛細(xì)管位置的校正，人工手動灌膠和建立
運(yùn)行的測序順序文件。
5.儀器將自動進(jìn)行序列分析，并可根據(jù)用戶要求進(jìn)行序列比較。如測序序列已知，-多少錢，可通過
序列比較以星號標(biāo)出差異堿基處，提高工作效率。
6.測序完畢按儀器操作規(guī)程進(jìn)行儀器清洗與保養(yǎng)。
蛋白質(zhì)的分離純化在生物化學(xué)研究應(yīng)用中使用廣泛，是一項(xiàng)重要的操作技術(shù)。 一個典型的真核細(xì)胞可以包含數(shù)以千計(jì)的不同蛋白質(zhì)，一些含量十分豐富，一些僅含有幾個拷貝。為了研究某一個蛋白質(zhì)，必須首先將該蛋白質(zhì)從其他蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)分子中純化出來。
一、主要方法
1. 蛋白質(zhì)的選擇吸附分離利用顆粒不同程度的顆粒吸附力來使分離的目的達(dá)到。
2. 按照配體特性的分離-親和層析利用蛋白質(zhì)分子與另一種稱為配體的分子能夠特異結(jié)合這一生物性質(zhì)。
3. 低溫沉淀法，使用如，-等與水可混溶的，降低多數(shù)蛋白質(zhì)的溶解度并且將其析出，和鹽析相比較，這種方法的分辨率的高，然而蛋白質(zhì)比較容易變形，需要在低溫下進(jìn)行。
4. 按照分子大小不一樣的方法，密度梯度離心在介質(zhì)中對蛋白質(zhì)離心時，fish檢測，蛋白質(zhì)沉降速度取決于它的和密度，和密度越大，那么沉降越快；凝膠過濾一種柱層析；超過濾利用蛋白質(zhì)分子不能從半透膜通過的性質(zhì)。
5. 按照溶解度差異分離，等電點(diǎn)沉淀法鹽溶與鹽析使用一定濃度鹽溶液來使蛋白質(zhì)的溶解度增大或減小；因?yàn)樵诘入婞c(diǎn)時蛋白質(zhì)分子的凈電荷為 0，使分子間靜電斥力減少了，所以，-沉淀比較容易，這時具有小的溶解度。
6. 按照電荷不同的分離方法。主要分為離子交換層析和電泳分離。
蛋白質(zhì)互作驗(yàn)證服務(wù)
在后基因組時代，基因的表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)作為生物功能直接的執(zhí)行者和體現(xiàn)者，在生物集體的生理及病理中扮演著重要的角色。高通量的蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)可以在上述過程中篩選出具有潛在價(jià)值的生物標(biāo)記和靶點(diǎn)。但是長期以來，-的蛋白質(zhì)表達(dá)分析譜并沒有提升我們對生物標(biāo)志物的認(rèn)識，其主要原因是差異蛋白的分析結(jié)果缺乏規(guī)模化的驗(yàn)證。
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