3、參數設置
使用488nm激發波長，525nm發射波長，實時或逐時間點檢測-前后熒光的強弱。dcf的熒光光譜和fitc非常相似，可以用fitc的參數設置檢測dcf。dcf的激發光譜和發射光譜參考下圖。
4、其它說明
陽性對照可以按照1：1000的比例使用。例如裝載好探針的細胞共1毫升，可以加入1微升的陽性對照-。通常-后20-30分鐘內可以觀察到非常-的活性氧水平升高。對于不同的細胞，活性氧陽性對照的效果可能有較大的差別。如果在-后30分鐘內觀察不到活性氧的升高，宜賓pcr，可以適當提高活性氧陽性對照的濃度。如果活性氧升高得過快，可以適當降低活性氧陽性對照的濃度。
另外，對于某些細胞，如果發現沒有-的陰性對照細胞熒光也比較強，可以按照1：2000-1：5000稀釋dcfh-da，使裝載探針時dcfh-da的濃度為2-5微摩爾/升。探針裝載的時間也可以根據情況在15-60分鐘內適當進行調整。
腺-包裝原理介紹
腺-是一種沒有包膜的直徑為79-90nm的顆粒，由252個 殼粒呈二十面體排列構成。每個殼粒的直徑為7-9nm。衣殼里是線狀雙鏈dna分子，兩端各有長約100bp的反向重復序列。人體腺- 已知有33種，分別命名為ad1-ad33，-怎么做，研究詳細得是ad2.
腺-是一種無包膜的球型結構的-，實時定量pcr，遺傳物質為線型 雙股dna形式。腺-的特點：1gan染范圍廣對人致病性低；2對增殖和非增殖細胞均具有gan染性；3能有效進行增殖； 4-滴度高；5不整合到染色體中，無插入致突變性；(6)外源基因裝載容量大。由于腺-的這些特點使其廣泛地應用于體 外基因轉導、體內接種yi苗、和基因zhi療等各個領域。
實驗方法
1.獲得目的基因序列；
2.構建-表達載體質粒；
3.表達載體質粒和包裝質粒重組；
4.gan染hek293，包裝出-；
5.-擴增、濃縮；
6.滴度測定。
20.primer設計的基本原則是什么？
答：引物設計的下列原則供您參考。
◆引物長度一般在18-35mer。
◆g-c含量控制在40-60%左右。
◆避免近3端有酶切位點或發夾結構。
◆如果可能避免在3端5個堿基有2個以上的g或c。
◆如果可能避免在3端1個堿基為a。
◆避免連續相同堿基的出現，-是要避免gggg或更多g出現。
◆退火溫度tm控制在 58-60c 左右。
◆如果是設計點突變引物，突變點應盡可能在引物的中間。
21.為什么引物的od260/od280小于1.5 ？
答：引物應該全是dna，但是od260/od280的比值為什么那么低，pcr實驗室，怎么會有蛋白質污染？引物化學合成，哪里有機會污染到蛋白質？需要-的是od260/od280的比值不能用來衡量引物的純度。od260/od280的比值過低一般是由于引物中c/t 的含量比較高所致。下表是一個20mer 同聚體引物的od260/od280的比值，清楚表明od260/od280的比值與引物的堿基組成密切相關。
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