蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定服務(wù)
蛋白質(zhì)protein是有機(jī)大分子,是構(gòu)成細(xì)胞的基本有機(jī)物和生命活動的主要承擔(dān)者。蛋白質(zhì)在催化生命體內(nèi)各種反應(yīng)進(jìn)行、---、抵御外來物質(zhì)入l侵及控制遺傳信息等方面都起著重要的作用。蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)是---酸序列,通過鑒定---酸序列來匹配它的蛋白質(zhì),這是定性研究,是蛋白質(zhì)組學(xué)的基礎(chǔ),也是蛋白質(zhì)組學(xué)的重要技術(shù)之一。
質(zhì)譜一般由離子源、分析器mass ---yzer和離子檢測器detector三部分組成。傳統(tǒng)的質(zhì)譜僅用于小分子揮發(fā)物質(zhì)的分析,但隨著新的離子化技術(shù)的出現(xiàn),如基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜(maldi-tof)和電噴霧電離質(zhì)譜(esi-ms)等,質(zhì)譜技術(shù)的出現(xiàn)為蛋白質(zhì)分析提供了一種新的途徑。現(xiàn)在蛋白質(zhì)組學(xué)基本研究手段是:以生物質(zhì)譜技術(shù)為,對蛋白質(zhì)進(jìn)行-、高通量分離、鑒定和分析。
蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定的基本原理是用蛋白酶將蛋白質(zhì)---成肽段混合物,經(jīng)maildi或esi等軟電離手段將其離子化,然后通過分析器將具有特定質(zhì)核比的肽段離子分離開來。通過實(shí)際譜圖和理論上蛋白質(zhì)經(jīng)過蛋白酶---后產(chǎn)生的一級質(zhì)譜峰圖和二級質(zhì)譜峰圖進(jìn)行的比對,進(jìn)行蛋白鑒定。
蛋白質(zhì)互作驗(yàn)證服務(wù)
在后基因組時代,基因的表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)作為生物功能直接的執(zhí)行者和體現(xiàn)者,在生物集體的生理及病理中扮演著重要的角色。高通量的蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)可以在上述過程中篩選出具有潛在價值的生物標(biāo)記和靶點(diǎn)。但是長期以來,-的蛋白質(zhì)表達(dá)分析譜并沒有提升我們對生物標(biāo)志物的認(rèn)識,其主要原因是差異蛋白的分析結(jié)果缺乏規(guī)模化的驗(yàn)證。
注意事項(xiàng)
1. 為了避免蛋白---性,pcr實(shí)驗(yàn)室,不要對樣品劇烈攪動和反復(fù)凍融。
2. 緩沖溶液成分盡量模擬細(xì)胞內(nèi)環(huán)。。
3. 為了避免蛋白質(zhì)的氧化,將 0.1~1 mmol/ldtt二硫蘇糖醇(或 β-巰加入到緩沖溶液中。
4. 為了避免重金屬對目標(biāo)蛋白的破壞,將 1~10 mmol/ledta 金屬螯合劑加入。
5. 為了避免微生物生長,使用滅菌溶液。在純化任何一種蛋白質(zhì)的時候,pcr實(shí)驗(yàn)室,均必須時刻對它的穩(wěn)定性注意維護(hù),使它的活性得到保護(hù),眉山pcr,需要牢記如下一些通用的注意事項(xiàng)。
6. 盡可能置于冰上或者在冷庫內(nèi)進(jìn)行操作。
7. 蛋白濃度不要太稀。
8. 除非是進(jìn)行---層。否則 ph 需要合適,防止所使用的緩沖溶液 ph 與 pi 相同,pcr,使蛋白質(zhì)的沉淀得以避免。
9. 使用蛋白酶,避免蛋白酶對目標(biāo)蛋白的降解;在純化細(xì)胞中的蛋白質(zhì)時,將 dna 酶加入來使得 dna 降解,避免 dna 對蛋白的污染。