選擇實驗外包公司需要注意哪些事項?
1. 實地考察
可以到公司實地考察一下實驗室,看一下實驗室環境、設備儀器情況,是否能滿足實驗方案所需條件。能整體承接課題,動物細胞。一些大型儀器公司不一定有,看有沒有高校平臺資源渠道共享。---是真實進行實驗的,這樣后續實驗結果數據也比較---。
2. 方案評估
實驗合作前期一般會進行所需實驗內容的評估,細胞系,來確定終實際實驗方案和報價。方案評估可以看出外包團隊的性。一個---的外包公司會對方案提出針對性的建議,評估各項實驗是否能做,以及根據預算情況和實際操作對細節適當地調整。任何實驗都是有不確定性的,但是前期敲定好方案能為后續實際開展實驗打下---基礎,也會省去許多---和麻煩。
三、自噬過程進行觀察和檢測
1、觀察自噬體的形成
由于自噬體屬于亞細胞結構,普通光鏡下看不到,因此,直接觀察自噬體需在透射電鏡下。phagophore的特征為:新月狀或杯狀,雙層或多層膜,有包繞胞漿成分的趨勢。自噬體(av1 )的特征為:雙層或多層膜的液泡狀結構,內含胞漿成分,如線粒體、內質網、核糖體等。自噬溶酶體(av2 )的特征為:單層膜,胞漿成分己降解。( autophagic vacuolo av )
2、在熒光顯微鏡下采用gfp-lc3融合蛋 白來示蹤自噬形成由于電鏡耗時長,不利于監測(monitoring) 自噬形成,人們利用lc3在自噬形成過程中發生---的現象開發出了此技術。無自噬時,gfp-lc3融合蛋 白彌散在胞漿中;自噬形成時,gfp-lc3融合蛋白轉 位至自噬體膜,在熒光顯微鏡下形成多個明亮的綠色熒光斑點,一個斑點相當于一個自噬體,可以通過計數來評價自噬活性的高低。
3、利用western blot檢測lc3-ii/比值的變化以評價自噬形成自噬形成時,胞漿型lc3 (即 lc3-i)會酶解掉一小段多肽,原代細胞,轉變為(自噬體)膜型(即lc3-id,因此,lc3-ii/比值 的大小可估計自噬水平的高低。(注意: lc3對lc3-ii有更高的親和力,會造成假陽性。方法2和3需結合使用,同時需考慮溶酶體活性的影響。)
4、mdc (monodansylcadaverine ,單丹---尸胺)染色:包括自噬體,所有酸性液泡都被染色,故屬于非特---的。
5、celltrackertm green染色:主要用于雙染色,但其能染所有的液泡,漢中細胞,故也屬于非特---的。
細胞培養中常見的生物污染包括---污染、霉菌污染、支原體污染、黑點污染、---污染和原生動物污染。這些污染在細胞培養中的特點及相應的解決辦法如下:
1.---污染
---在普通倒置顯微鏡下呈黑色和細砂狀。根據gan染菌的種類不同,可能會呈現不同的形狀,培養液一般會變得渾濁、黃色,流式細胞技術,對細胞生長有明顯影響。
解決方法:仔細檢查器具的滅菌情況,---通風時間和高壓滅菌器的壓力是否足夠。重要的是,與培養基接觸的移液管等物品如果被污染兩次,則可能會導致儲存溶液也受到污染。所以一定要注意!下次使用前要檢查培養基的渾濁度。此外,建議在培養基中添加抗生su。