自噬(autophagy)是細胞受到---后吞噬自身的細胞質或細胞器，終將吞食物在溶酶體內降解的過程，自噬體(autophagosome)為雙層膜包被的圓形或橢圓形結構，內含細胞質、長壽蛋白質和異常蛋白---物，損傷或多余細胞器如線粒體、粗面內質網和微體、
---和---等。單丹---尸胺(dansylcadaverine，mdc是一種熒光色素，是嗜酸性染色劑，通常被于檢測自噬體形成的特---標記染色劑，其檢測激發濾光片波長355nm ，阻斷濾光片波長512nm。leagene mdc染色液適用于培養細胞的自噬染色，單細胞測序，可與eb合用雙染。
軟瓊脂培養克l隆形成試驗基本步驟:
(1)取對數生長期細胞，用0.25%胰蛋白酶---并輕輕吹打，使之成為單細胞，作活l細胞計數，用含20%胎牛血l清的dmem培養液調整細胞密度至1x106細胞/l。然后根據實驗要求作梯度倍數稀釋。
(2)用蒸餾水分別制備出1.2%和0.7%兩個濃度的低溶點瓊脂糖液，高壓滅菌后，維持在40日中不會凝固。
(3)按1:1比例使1.2%的瓊脂糖和2xdmem培養基(含有2x和20%的小牛血l清)混合后，取3ml混合液注入直徑6cm平皿中(10cm平皿加7~ 10ml)，冷卻凝固，可作底層瓊脂置co2溫箱中備用。
(4)按1:1比例讓0.7%的瓊脂糖和2xdmem培養基在無菌試管中相混以后，再向管中加入0.2ml的細胞懸液，充分混勻，注入鋪有1.2%瓊脂糖底層平皿中，逐形成雙瓊脂層。待上層瓊脂凝固后，置入37回5%co2溫箱中培養10~14天。
(5)把平皿放置在倒置顯微鏡下，細胞實驗，觀察細胞數。計算形成率。軟瓊脂培養法常用檢測腫l瘤細胞和轉化細胞系。試驗中瓊脂與細胞相混時，瓊脂溫度不宜超過40日。接種細胞的密度每平方厘米不超過35個，一般6cm的平皿接種1000個細胞。正常細胞在懸浮狀態下不能增殖，不適用于軟瓊脂克l隆形成試驗。
軟瓊脂集落形成率實驗(軟瓊脂克l隆)
將1.2%低熔點瓊脂糖與2x細胞培養基以1:1的體積比混合制備0.6%的底層瓊脂，6孔板中每個孔1.4ml溫室凝固，取對數期細胞，胰酶---后吹散成單個細胞懸液，計數，新疆細胞，并調細胞濃度為10000個/ml，將0.6%低熔點瓊脂糖與2x細胞培養基以1:1的體積比混合，制備0.3%的上層瓊脂，每孔加1ml 上層瓊脂和100ul單細胞懸液(約1000ell/wel)， 混勻，流式細胞實驗，室溫凝固。置于37目，5%co2的細胞培養箱中培養2-3周，計數含50個細胞以上得克l隆，計算細胞集落形成率，spotll 采集圖像。
細胞培養中常見的污染及解決方法
霉菌污染
正常情況下，培養基在 37℃ 培養箱中培養兩三天，在倒置顯微鏡下仍保持透明，無雜質。一旦出現絮狀雜質，顯微鏡下可見絲狀和團塊狀漂浮物，菌絲明顯。此時，雖然細胞仍在生長，但它們的生命狀態會在長時間后逐漸惡化。
解決方法：用---銅溶液擦拭 co2 培養箱，向托盤中加入飽和---銅或消毒后加入飽和磷---二鈉高鹽溶液，避免霉菌污染。
如果霉菌污染，暫時轉移所有細胞，并立即使用 guo 氧擦拭培養箱，包括層板和內壁。將 guo 氧放在培養箱中一小時，使蒸汽擴散，待 guo 氧氣味消散后，將細胞轉移到培養箱中。值得注意的是，培養箱需要每兩個月定期清洗一次，尤其是在梅雨季節。用 84 消毒液、清水和 75% 酒精連續擦拭培養箱，用紫外線照射也是一種有效的方法。
為防止霉菌污染，需添加 3μg/ml 、抑制素、fang
線菌素 d 或青鏈。一旦被污染，就不可能恢復，即使使用上述，也沒有什么區別。對于支原體污染的細胞培養，選擇是丟棄污染的培養物，并用使用新鮮的無支原體的儲存液，消毒環境。如果所有的細胞都被污染了，那可能是整個培養系統污染了。因此，必須對培養基和實驗設備進行檢查。如果只是個別污染，可能是操作問題，有---注意實驗操作步驟的規范。
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