13.合成的引物5端是否有磷酸化
答：合成的引物5為-，沒有磷酸基團。如果需要您可以用多核苷酸激酶進行5′端磷酸化，或者要求引物合成公司合成時直接在5′或3′端進行磷酸化，需要另外收費。
14.引物片段退火后不能連接到載體上是什么問題？
連接反應(yīng)需要引物的5磷酸基團。如果需要將合成的引物退火直接連接相應(yīng)的載體上，引物需要磷酸化。磷酸化的產(chǎn)物如果還不能連接載體上，南充pcr，需要檢查載體的酶切效果，需要-引物退火的條件。sirna分子具有特殊的對稱結(jié)構(gòu)，退火的難度較大，退火時需要提高退火溫度。
分子生物學(xué)檢測
分子生物學(xué)作為現(xiàn)代生物技術(shù)中zui為-的實驗手段之一，-，已經(jīng)廣泛滲透到生命科學(xué)的各個領(lǐng)域，在基礎(chǔ)研究、醫(yī)l療診斷等領(lǐng)域均起到了非常重要的作用。
借助的技術(shù)優(yōu)勢，英瀚斯生物特配備了高l效的儀器設(shè)備，如slan 48p 熒光定量pcr檢測系統(tǒng)、pcr儀、電泳儀、冷凍離心機、高速離心機等。目前公司可為您提供反轉(zhuǎn)錄pcr、熒光定量pcr、凝膠電泳遷移率等檢測服務(wù)，-縮短您的實驗周期、降低您的實驗成本。
全轉(zhuǎn)錄組測序
全轉(zhuǎn)錄組是指特定組織或細(xì)胞在特定狀態(tài)下所有轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的總和，包括mrna和各種noncoding rna。我們知道生物體本身的轉(zhuǎn)錄過程是一個動態(tài)變化且十分復(fù)雜的分子作用網(wǎng)絡(luò)，如果只是對某個單一rna分子的研究，-怎么做，有時并不能準(zhǔn)確的發(fā)現(xiàn)分子作用機制。而競爭性內(nèi)源rna(cerna)理論闡述了一種全新的轉(zhuǎn)錄調(diào)控模式：cerna包括lncrna、circrna、mrna、假基因等分子能夠通過mirna應(yīng)答元件microrna respe element， mre競爭性地結(jié)合相同的mirna來調(diào)節(jié)彼此的表達水平。舉個例子：mirna會導(dǎo)致基因沉默現(xiàn)象發(fā)生，而如果lncrna競爭性結(jié)合了mirna，從而影響了mirna基因沉默功能實現(xiàn)。
cerna是目前轉(zhuǎn)錄調(diào)控領(lǐng)域的-內(nèi)容之一，通過全轉(zhuǎn)錄組研究能夠系統(tǒng)性的闡述cerna的分子作用機制。目前對全轉(zhuǎn)錄組簡便的方法就是構(gòu)建2個測序-分別進行測序。標(biāo)準(zhǔn)的生物信息學(xué)分析能夠得到mrna、lncrna、circrna、mirna各自的研究內(nèi)容，靶向調(diào)控網(wǎng)絡(luò)、cerna網(wǎng)絡(luò)、共表達網(wǎng)絡(luò)分析可以將這幾種rna聯(lián)合起來分析，從而發(fā)現(xiàn)新的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)模型。去除rrna的鏈特--，含有的rna信息含量十分豐富，實時熒光定量pcr，通過測序和生物信息學(xué)分析能夠得到mrna、lncrna、circrna的鑒定及注釋信息。不過該-構(gòu)建時會進行片段化選擇從而濾掉了small rna的信息，所以需要另外再構(gòu)建一個small rna-，進行測序分析后可以得到mirna和其他small rna的鑒定及注釋信息。全轉(zhuǎn)錄組測序方案路線圖如下所示：
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