二、大腸菌群檢驗方法:
由于大腸菌群指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關的-，即:需氧及兼性厭氧、在37°c能分解乳糖產酸產氣的革蘭氏陰性無芽胞。因此大腸菌群的檢測一般都是按照它的定義進行。 目前國內采用的進出口食品大腸菌群檢測方法主要有和原商檢局制訂的行業標準。兩個標準方法在檢測程序上略有不同。
(一):采用三步法，即:乳糖發酵試驗、分離培養和證實試驗。乳糖發酵試驗:樣品稀釋后，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種三管乳糖膽鹽發酵管。36士1c培養48土2h，觀察是否產氣。分離培養:將產氣發酵管培養物轉種于伊紅美藍瓊脂平板上，36士1°c培養18-24h，觀察菌落形態。證實試驗:挑取平板上的菌落，進行革蘭氏染色觀察。同時接種乳糖發酵管36士1°c培養24土2h，觀察產氣情況。
報告:
根據證實為大腸陽性的管數，查mpn表，報告每100ml ( g)大腸菌群的mpn值。具體操作參見gb4789. 3-94 《--食品衛生微生物學檢驗大腸菌群測定》
(二)原商檢局制訂的行業標準，等效采用美國fda的標準方法，用于對出口食品中的大腸進行檢測。本方法采用兩步法：推測試驗:樣品稀釋后，實時熒光定量pcr，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種三管lst肉湯。36士1c培養48士2h，觀察是否產氣。證實試驗:將產氣管培養物接種煌綠乳糖膽鹽(bglb)肉湯管中，36士1°c培養48士2h，觀察是否產氣。以bglb產氣為陽性。查mpn表，-怎么做，報告每ml(g)樣品中大腸菌群的mpn值。具體操作參見sn0169-92《--進出口商品檢驗行業標準 出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸檢驗方法》
22.同樣的od用page檢測，eb染色為什么深淺不一？
答：通常可以用eb染色的方法來判斷雙鏈dna的量(如質粒dna)，因為eb可以嵌合到雙鏈dna中。而合成的單鏈dna，西藏pcr，由于堿基組成不同，形成二級結構的可能性不同，eb的染色程度也會有差異，比如oligo(dt)等不形成二級結構，eb染色效果就非常差。所以不要用eb染色的方法來定量，而用紫外分光光度計檢測。同樣道理，用eb染色來照片不適合所有引物。
23.引物不純會有什么后果？
答：引物不純可能會導致：1)非特-擴增；2)無法用預先設計在引物5′端酶切位點的酶切開，-是沒有保護堿基的引物；3) 用于測序出現雙峰或亂峰。解決辦法重新合成或重新純化。
24.已經溶解的引物，為什么原先使用正常，而過一段時間再使用就不好了？
答：如果溶解引物的水ph過低或污染了菌或-酶，會使引物降解。使用時沒有充分解凍混合，-，液體不均勻也可能會造成引物加入量不準確。建議分裝引物，避免反復凍溶。建議使用10mmt ris ph7.5緩沖液溶解引物，因為有些蒸餾水的ph值比較低ph4-5， 引物在這種條件下不穩定。還有一種可能性是引物沒有問題，而是pcr使用材料-是模板的與先前使用的不完全一致。
凝膠阻滯遷移電泳檢測服務emsa
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