rna提取及注意事項
研究基因的表達(dá)和調(diào)控時，需要從組織或細(xì)胞中分離純化rna。rna的高低經(jīng)常影響rt-pcr、cdna庫構(gòu)建和northern blot等分子生物學(xué)實(shí)驗的成敗。
主要試劑
trizol是一種新型總rna抽提試劑，內(nèi)含異-胍等物質(zhì)，能迅速破碎細(xì)胞，抑制細(xì)胞釋放出的-酶。
1.
trizol試劑含有，具有毒性和-性，西藏pcr，注重操作。
2.
rnase污染的主要來源是操作過程中手和空氣中的浮沉，注重配帶手套，樣品盡可能蓋嚴(yán)。
3. 細(xì)胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全會降低后得率，因為一部分rna會殘留在未裂解的細(xì)胞中。細(xì)胞裂解之后要看不見顆粒狀物質(zhì)結(jié)締組織和骨除外。在清洗和裂解細(xì)胞時在低溫下操作，防止在操作過程中釋放的內(nèi)源rnase降解了rna。
4. 酵母和一些-由于細(xì)胞壁的-結(jié)構(gòu)，-怎么做，可以加入trizol試劑同時加入無rnase的玻璃珠并劇烈振蕩，使細(xì)胞裂解充分。
2-8℃ 避光保存一年。
southern雜交
實(shí)驗原理
southern印跡雜交southern blot是1975年由英-southern創(chuàng)建，實(shí)時熒光定量pcr，是研究dna圖譜的基本技術(shù)。southern印跡雜交是進(jìn)行基因組dna特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經(jīng)-性內(nèi)切酶-的dnal片段，將膠上的dna變性并在原位將單鏈dnal片段轉(zhuǎn)移至尼龍膜或其他固相支持物上，經(jīng)干烤或者紫外線照射固定，再與相對應(yīng)結(jié)構(gòu)的標(biāo)記探針進(jìn)行雜交，用放l射自顯影或酶反應(yīng)顯色，從而檢測特定dna分子的含量。
蛋白質(zhì)定量組學(xué)服務(wù)
細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)組豐度的動態(tài)變化對不同生命過程有重要影響。例如在許多-的發(fā)生和發(fā)展進(jìn)程中，常常伴隨著某些蛋白質(zhì)的表達(dá)異常。目前定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)主要分為標(biāo)記(label)策略和非標(biāo)記的(label free)定量策略，其中標(biāo)記策略又分為體內(nèi)標(biāo)記(如 silac、15n 標(biāo)記)，以及體外標(biāo)記(如 itraq、tmt 標(biāo)記) 。
傳統(tǒng)的基于2d雙向凝膠電泳分離的蛋白質(zhì)組通常可以鑒定出約1000種蛋白，對全蛋白質(zhì)組的覆蓋僅在5~10%左右，pcr，不能滿足高通量定量蛋白質(zhì)表達(dá)譜分析的要求。我們結(jié)合樣品制備與高分辨率、高靈敏度的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，可在細(xì)胞與組織類樣品中鑒定直至多于10000個蛋白，對全蛋白質(zhì)組的覆蓋>;60%。結(jié)合生物信息學(xué)分析，為您構(gòu)建高通量蛋白質(zhì)定量表達(dá)譜。
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