自噬流檢測
自噬是調(diào)節(jié)真核細鵬生長、和能量代謝的重要生物學(xué)機制。細胞自噬行使其生物學(xué)功能的前提是自噬流的話化。大量證據(jù)表明自噬流受損與多種慢性炎性---，---是、神經(jīng)退行性---及組織纖維化的發(fā)病密切相關(guān)，目前對于自噬液的檢別是自噬與其相關(guān)---研究領(lǐng)域的---。由于自噬流是一個曲多個步驟組成的動態(tài)過程。因此往需要精細的突驗才能準(zhǔn)確判斷自啦流狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)中常見的污染及解決方法
---污染
---污染后，培養(yǎng)基一般清澈，保持原色。細絲可以在顯微鏡下觀察到。，一些---類似于---碎片，但其中許多清晰可見，看起來像珊瑚，293t細胞，比較容易區(qū)分。此外，它們會慢慢長出細細的黑色細絲，因為它們生長得比較慢，不像---那樣容易被發(fā)現(xiàn)，一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基被污染，它們將很難存活。
解決方法：一旦被---污染，果斷丟棄，然后對細胞房、co2 培養(yǎng)箱、器皿和培養(yǎng)基進行消毒。
細胞elispot檢測
1．培養(yǎng)板的預(yù)處理：在24孔培養(yǎng)板內(nèi)加0.5ml 0.2%戊er醛，細胞實驗室，37℃，4h，棄掉板中的處理液，用pbs洗滌3次，每次3min；
2．抗原包被：將適量抗原溶于包被緩沖液中，每孔加入0.5ml，4℃過夜，pbs-t洗滌3次，每次3min；
3．制備細胞懸液：將待測已致敏小鼠處死，取出pi臟，置于加有hanks液的平皿內(nèi)，用鈍頭直角9號zhu射器針頭破少許脾被膜后，趕出細胞，用毛細吸管輕輕吹散細胞團后，將懸液通過250目尼龍網(wǎng)，西安細胞，取濾液，1000r/min離心5min，hanks液洗滌3次，計數(shù)細胞后，用1640液重新懸浮細胞，配成所需濃度；
4．往各孔中加入0.5ml含不同濃度104-106/ml的細胞懸液，置37℃，5％co2條件下孵育2-4h，棄掉培養(yǎng)液，pbs-t洗滌3次，每次3min；
5．往各孔中加入0.5ml生物素化抗tibio-ab2μg/ml，37℃孵育1h或4℃過夜，棄掉液體，pbs-t洗滌3次，每次3min；
6．加入辣根---化物酶結(jié)合的親合素avi-hrp2μg/ml，37℃孵育30min，棄掉液體，pbs-t洗滌3次，單細胞測序，每次3min；
7．配制明膠-底物液：在37℃水浴中，將2.5mltmb溶液4mg/ml jia醇溶液滴加入7.5ml10%明膠溶液用ph5.0磷酸鈉-檸檬酸緩沖液配制邊加邊攪，溶液呈白色，加入14μl 3% h202；
8．顯色與計數(shù)：將培養(yǎng)板底冰浴，每孔加入0.6ml明膠-底物液，約3min，混合液凝固，將培養(yǎng)板取出，置室溫5min，將板倒置，用肉眼和低倍放大鏡計數(shù)所顯示出的顏色的斑點。
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