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1.標準品的稀釋與加樣
2.加樣：分別設空白孔空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl樣品終稀釋度為5倍。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將3048t的20倍倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048t的20倍倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑a50μl，再加入顯色劑b50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應此時藍色立轉黃色。
11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度od值。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
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