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1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣
2.加樣：分別設(shè)空白孔空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl樣品終稀釋度為5倍。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將3048t的20倍倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048t的20倍倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑a50μl，再加入顯色劑b50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。
11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度od值。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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