上海酶聯生物科技有限公司為您提供dcl1荷蘭黑白花奶牛牛肺細胞。
細胞名稱:
種屬來源:
組織來源:
特 征:
細胞形態:
生長特性:
培 養 基:
生長條件:
傳代方法:
凍存條件:
支原體檢測:
特點和簡介
該細胞系來源于一雄性荷蘭黑白花奶牛的肺組織。1990年由中科院昆明細胞庫建立。
接受后處理
1) 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們。
2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，去掉封口膜并將t25瓶置于37℃培養約2-3h。
3) 棄去t25瓶中的培養基，添加6ml本公司附帶的完全培養基。
4) 如果細胞密度達80%-90%請及時進行細胞傳代，傳代培養用6ml本公司附帶的完全培養基。
5) 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發現污染或---污染，請及時與我們取得聯系。
培養操作
1復蘇細胞：將含有 1ml 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4ml 培養基混合均勻。在 1000rpm 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2ml 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜。第二天換液并 檢查細胞密度。
2細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 pbs 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml ---液0.25%trypsin-0.53mm edta于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中--- 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞---情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000rpm 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2ml 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3細胞凍存：待細胞生長狀態---時，可進行細胞凍存。下面 t25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養基后，pbs 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止---，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加入血 清和 dmso，輕輕混勻，dmso 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
培養注意事項
1.收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現 象發生請及時和我們聯系。
2.仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所 需細胞因子等，---細胞培養條件一致。若由于培養條件不一致而導致細胞出現問 題，責任由客戶自行承擔。
3.用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶壁脫落，將細胞置于培養箱內靜置培養 4~6 小時,再取出觀察。此時多數細胞均 會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養；如果染色結果顯示細胞無活力，請拍下 照片及時和我們聯系，信息確認后我們為您再免費寄送一次。
4.靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內的培養基倒出，留 6~8ml 維持細胞正常培養，待細 胞匯合度 80%左右時正常傳代。
5.請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。培養瓶內多余的培養基可收集備用，細胞 傳代時可以一定比例和客戶自備的培養基混合，使細胞逐漸適應培養條件。
6.建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術 部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯 系，告知細胞的具體情況，以便我們的------回訪直至問題解決。
7.該細胞僅供科研使用。
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