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本試劑盒應用雙抗體夾心酶標免疫分析法測定標本中aif水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入aif抗原、生物素化的抗小鼠aif抗體、hrp標記的親和素，經過---洗滌后用底物tmb顯色。tmb在---化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的aif呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度od值，計算樣品濃度。
試劑配制:
1、酶聯板assay plate ：一塊96孔或者48孔。
2、標準品standard：2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根---化物酶標記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根---化物酶標記親和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。
操作流程：
1待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。
2酶標板置4℃，包被過夜。
3洗板：吸干孔內反應液，用洗滌液過洗一遍將洗滌液注滿板孔后，即甩去，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
4陰性對照孔每孔加入pbs 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。
5酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。
6洗板，同4。
7每孔加1:5000稀釋的hrp-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
8酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。
9洗板，同4。
10每孔加tmb顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。
11每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應。
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