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1待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl!
2酶標板置4℃,包被過夜。
3洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍將洗滌液注滿板孔后,即甩去,之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
4陰性對照孔每孔加入pbs 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。
5酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min!
6洗板,同4。
7每孔加1:5000稀釋的hrp-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl!
8酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min!
9洗板,同4!
10每孔加tmb顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
11每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應!
12分別測450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2,終測得的od值為兩者之差w1-w2,以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
13數據處理:在得出標本s和陰性對照n的 od值后,計算s/n值。s/n***2.1為陽性判定標準。
人胡蘿卜素檢測試劑盒請貯存于2-8℃,切勿冷凍,避免陽光直曬。未使用完的酶標板條應密封,2-8℃保存,具有方便、快速、靈敏等特點,因其性質穩定、使用方便、價格低廉、在科研領域用途比較廣泛,本elisa試劑盒有效期為12個月,生產日期見批號,實驗顯色深,含量少,顯色淺,含量多,本試劑盒靈敏度請來電詳詢。
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